| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-24页 |
| ·花生四烯酸的简介 | 第9-14页 |
| ·花生四烯酸的主要分布和来源 | 第9-10页 |
| ·花生烯烯酸的主要功能 | 第10-12页 |
| ·花生四烯酸的应用 | 第12-14页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的简介 | 第14-18页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的分类 | 第14-15页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的结构 | 第15-16页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的分子生物学研究 | 第16-18页 |
| ·大肠杆菌表达系统的研究进展 | 第18-24页 |
| ·大肠杆菌表达系统的特点 | 第18-19页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的高效表达原理 | 第19-21页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的高效表达策略 | 第21-23页 |
| ·应用前景及展望 | 第23-24页 |
| 第二章 深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因的克隆及分析 | 第24-36页 |
| ·材料与方法 | 第24-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·培养基及溶液的配置 | 第24-25页 |
| ·主要仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·菌种活化及培养 | 第26页 |
| ·深黄被孢霉总 RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因 cDNA 的合成 | 第27页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因的扩增 | 第27页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因 PCR 产物的电泳分析 | 第27-28页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因的回收与纯化 | 第28页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第29页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因重组质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-34页 |
| ·深黄被孢霉总 RNA 的提取 | 第31页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因的 PCR 扩增结果 | 第31-32页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因重组质粒的 PCR 鉴定结果 | 第32页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因重组质粒的酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶基因的测序结果分析 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34页 |
| ·小结 | 第34-36页 |
| 第三章 深黄被孢霉△5 脂肪酸脱氢酶在大肠杆菌中的表达和鉴定 | 第36-48页 |
| ·材料与方法 | 第36-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要溶液 | 第36-39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·重组质粒和表达载体的双酶切 | 第40页 |
| ·△5 脂肪酸脱氢酶基因以及表达载体的回收与纯化 | 第40页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第40页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态 | 第40-41页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第41页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒转化表达宿主菌 | 第42页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达以及 SDS-PAGE 分析 | 第42-43页 |
| ·表达产物的 Western bloting 鉴定 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-46页 |
| ·重组质粒的双酶切 | 第44页 |
| ·表达宿主菌的菌液 PCR 鉴定 | 第44页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达的 SDS-PAGE 分析 | 第44-45页 |
| ·表达产物的 WB 分析 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第四章 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
