| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略语 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一部分 综述 | 第12-37页 |
| 第一章 昆虫先天免疫系统 | 第12-29页 |
| 1.模式识别受体和抗菌肽 | 第12-17页 |
| ·肽聚糖识别蛋白 | 第12-15页 |
| ·肽聚糖识别蛋白的发现 | 第13页 |
| ·肽聚糖识别蛋白的类别与特性 | 第13-15页 |
| ·肽聚糖识别蛋白的空间结构 | 第15页 |
| ·肽聚糖识别蛋白的功能 | 第15页 |
| ·革兰氏阴性菌结合蛋白 | 第15-16页 |
| ·抗菌肽 | 第16-17页 |
| ·杀菌肽(cecropin) | 第16-17页 |
| ·鞘翅杀菌肽(coleoptericin) | 第17页 |
| ·防御素(defensin | 第17页 |
| 2.体液免疫 | 第17-19页 |
| ·Toll 信号通路 | 第18页 |
| ·Imd 信号通路 | 第18-19页 |
| ·JAK/STAT 信号通路 | 第19页 |
| 3.细胞免疫 | 第19页 |
| 4. 酚氧化酶原级联反应 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-29页 |
| 第二章 抑制差减 cDNA 文库 | 第29-37页 |
| 1.抑制差减 cDNA 文库的构建 | 第29-32页 |
| ·差减文库的种类 | 第29-31页 |
| ·抑制差减文库方法 | 第31页 |
| ·抑制差减文库的应用 | 第31-32页 |
| 2. 目的基因筛选 | 第32-34页 |
| ·从非全长 cDNA 文库中筛选新基因 | 第32-33页 |
| ·RACE 法 | 第32-33页 |
| ·PCR 法从 cDNA 文库中快速克隆基因 | 第33页 |
| ·从全长 cDNA 文库中进行杂交筛选 | 第33-34页 |
| ·标记探针 cDNA 文库筛选法 | 第33页 |
| ·反向 PCR | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-37页 |
| 第二部分 研究内容 | 第37-103页 |
| 第一章 光滑鳖甲的饲养与繁殖 | 第37-45页 |
| 1 材料与方法 | 第38-40页 |
| ·试虫采集 | 第38页 |
| ·成虫的饲养 | 第38页 |
| ·卵的收集及观察 | 第38页 |
| ·幼虫的收集，饲养及观察 | 第38-39页 |
| ·细菌免疫诱导 | 第39页 |
| ·血淋巴中提取蛋白质 | 第39-40页 |
| ·琼脂孔扩散抑菌实验 | 第40页 |
| 2. 结果 | 第40-42页 |
| ·卵 | 第40-41页 |
| ·幼虫 | 第41页 |
| ·光滑鳖甲各龄期血淋巴粗提蛋白的抑菌活性检测 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 第二章 光滑鳖甲总 RNA 的提取 | 第45-53页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·光滑鳖甲细菌诱导处理 | 第45-46页 |
| ·光滑鳖甲的人工繁殖 | 第45-46页 |
| ·幼虫的细菌诱导处理 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-50页 |
| ·光滑鳖甲总 RNA 提取 | 第47-50页 |
| ·TRIzol 法提取不同材料的 RNA 条带差异比较 | 第47页 |
| ·不同提取方法对荒漠甲虫总 RNA 完整性的比较 | 第47-48页 |
| ·不同提取方法对荒漠甲虫总 RNA 纯度的影响 | 第48-49页 |
| ·不同 RNA 提取方法稳定性的比较 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第三章 光滑鳖甲抑制差减文库构建 | 第53-88页 |
| 1 材料与方法 | 第54-64页 |
| ·mRNA 的分离纯化 | 第54页 |
| ·SSH 文库构建 | 第54-59页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第54页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第54-55页 |
| ·双链 cDNA Rsa Ι酶切 | 第55-56页 |
| ·Rsa Ι酶切的 tester cDNA 片段与接头连接 | 第56-57页 |
| ·第一次差减杂交 | 第57页 |
| ·第二次差减杂交 | 第57-58页 |
| ·第一次 PCR 扩增 | 第58页 |
| ·第二次 PCR 扩增 | 第58-59页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第59页 |
| ·重组 cDNA 质粒的构建 | 第59-60页 |
| ·连接 | 第59-60页 |
| ·用于筛选阳性克隆的 LB 平板 | 第60页 |
| ·转化 | 第60页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第60-61页 |
| ·文库的质量检测 | 第61-62页 |
| ·重组率的计算 | 第61页 |
| ·菌落 PCR 鉴定阳性克隆 | 第61-62页 |
| ·差示筛选（反向 Northeren Blot） | 第62-63页 |
| ·DIGDNA 标记 | 第62页 |
| ·标记效率检测 | 第62-63页 |
| ·DNA 的固定 | 第63页 |
| ·预杂交和杂交 | 第63页 |
| ·免疫检测 | 第63页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第63-64页 |
| ·序列比对 | 第64页 |
| ·功能归类 | 第64页 |
| 2 结果 | 第64-82页 |
| ·光滑鳖甲 mRNA 分离纯化 | 第64页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第64-65页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第65-66页 |
| ·双链 cDNA Rsa Ι酶切 | 第66页 |
| ·重组率的计算 | 第66-67页 |
| ·差异表达 cDNA 的 PCR 产物检测 | 第67-68页 |
| ·地高辛dUTP 进行随机引物 DNA 标记筛选结果 | 第68-73页 |
| ·阳性克隆测序及结果分析 | 第73-82页 |
| ·抑制差减文库序列分析 | 第73-77页 |
| ·阳性克隆序列结果分析 | 第77-82页 |
| 3 讨论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 第四章 光滑鳖甲抗菌肽与肽聚糖识别蛋白基因的克隆 | 第88-103页 |
| 1 材料与方法 | 第88-92页 |
| ·一链合成 | 第89-90页 |
| ·阳性对照 RACE PCR | 第90-91页 |
| ·cDNA 末端快速扩增（RACE） | 第91-92页 |
| 2 结果 | 第92-100页 |
| ·光滑鳖甲总 RNA 提取 | 第92-93页 |
| ·抗菌肽 AMPFA5，AMPFA85 全长扩增 | 第93-99页 |
| ·肽聚糖识别蛋白 PGRPFA21，PGRPFD1 全长扩增 | 第99-100页 |
| 3 讨论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-103页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 个人简历 | 第106页 |
