| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-24页 |
| ·油菜杂种优势的利用 | 第10页 |
| ·细胞质雄性不育与恢复基因的研究 | 第10-15页 |
| ·细胞质雄性不育 | 第11-12页 |
| ·植物细胞质雄性不育育性恢复基因研究 | 第12-14页 |
| ·油菜波里马细胞质雄性不育恢复基因的研究及应用 | 第14-15页 |
| ·植物分子标记开发研究进展及其运用 | 第15-20页 |
| ·利用数据库序列和生物信息学手段开发新的分子标记 | 第16-18页 |
| ·利用分子生物学实验技术开发新的分子标记及运用 | 第18-20页 |
| ·植物基因分离中的图位克隆技术 | 第20-22页 |
| ·图位克隆的技术环节 | 第20-22页 |
| ·图位克隆技术存在的问题 | 第22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-32页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·标记的开发与验证 | 第24-25页 |
| ·序列对比与标记的开发 | 第24页 |
| ·DNA混合池的构建 | 第24-25页 |
| ·验证SCAR标记 | 第25页 |
| ·交换单株的鉴定 | 第25-27页 |
| ·单株叶片样品DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·交换单株的检测与遗传图谱的绘制 | 第26页 |
| ·恢复基因标记通用性检测 | 第26-27页 |
| ·与恢复基因相关的BAC克隆的PCR鉴定分析 | 第27-30页 |
| ·BAC克隆的阳性验证 | 第27页 |
| ·BAC克隆质粒的抽提 | 第27-28页 |
| ·质粒扩增片段的克隆、测序及分析 | 第28-29页 |
| ·质粒扩增片段的序列分析 | 第29-30页 |
| ·PCR walking分离侧翼序列 | 第30-31页 |
| ·酶切-连接文库的准备 | 第30页 |
| ·PCR Walking引物的设计 | 第30-31页 |
| ·第一轮PCR | 第31页 |
| ·第二轮PCR | 第31页 |
| ·PCR Walking产物的回收、克隆、测序 | 第31页 |
| ·PCR Walking序列的分析 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-39页 |
| ·目标位点连锁标记与拟南芥序歹Jl、白菜的同源性BLAST | 第32页 |
| ·连锁标记的获得 | 第32-33页 |
| ·所得标记与Rfp的遗传距离确认与遗传图谱绘制 | 第33-34页 |
| ·恢复基因PPR基序的鉴定 | 第34页 |
| ·Southern杂交筛选候选克隆及其BAC克隆的阳性验证 | 第34-36页 |
| ·PCR Walking | 第36-38页 |
| ·PCR Walking引物的设计 | 第36-37页 |
| ·PCR Walking结果分析 | 第37-38页 |
| ·标记通用性检测结果 | 第38-39页 |
| ·通用性检测F_2群体构建与育性调查 | 第38页 |
| ·新群体标记分析 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| ·恢复基因(Rfp)标记开发 | 第39-40页 |
| ·恢复基因PPR基元序列染色体步移,实现图位克隆的可行性分析 | 第40页 |
| ·用生物信息学技术分离目的基因的优点及不足 | 第40-41页 |
| ·克隆Rfp基因的下一步工作建议 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 附表1:白菜BAC序列开发的标记信息 | 第49-50页 |
| 附表2:4个AFLP标记在29份亲本中的扩增情况 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
