| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| ·HIV的研究进展 | 第11-21页 |
| ·HIV-1简介 | 第11页 |
| ·HIV-1的基因组结构及其相关蛋白的功能 | 第11-18页 |
| ·HIV的基因组结构 | 第12-13页 |
| ·Gag蛋白以及病毒粒子的结构与组装 | 第13-14页 |
| ·Tat | 第14页 |
| ·Rev | 第14页 |
| ·Nef | 第14页 |
| ·Vpr | 第14-15页 |
| ·Vpu | 第15页 |
| ·Vif | 第15页 |
| ·Pol | 第15页 |
| ·PR | 第15页 |
| ·RT | 第15页 |
| ·IN | 第15-16页 |
| ·RNA | 第16页 |
| ·Env (gp120-gp41) | 第16-17页 |
| ·TM(gp41)的三级结构 | 第17-18页 |
| ·HIV-1膜融合抑制剂膜融合机制 | 第18-20页 |
| ·膜融合抑制剂 | 第20页 |
| ·膜融合抑制剂HR212 | 第20-21页 |
| ·HIV的治疗与预防 | 第21-22页 |
| ·在烟草中的表达膜融合抑制剂HR212及活性检测 | 第22-24页 |
| 第二章 膜融合抑制剂HR212在烟草中的表达 | 第24-65页 |
| 引言 | 第24页 |
| ·材料与方法 | 第24-54页 |
| ·试剂和仪器 | 第24-29页 |
| ·序列的优化设计 | 第29-31页 |
| ·密码子的优化 | 第29-30页 |
| ·mRNA二级结构的优化 | 第30页 |
| ·表达元件的优化 | 第30-31页 |
| ·有关TMV克隆的表达的方法 | 第31-38页 |
| ·TMV基本的密码子、mRNA二级结构的优化 | 第31页 |
| ·载体pSPDK661和基因序列的设计 | 第31-32页 |
| ·TMV四个克隆序列的设计 | 第32-33页 |
| ·TMV相关引物的设计 | 第33-38页 |
| ·基因表达载体pSPDK661的构建 | 第38-40页 |
| ·菌种活化 | 第38-39页 |
| ·质粒的提取 | 第39页 |
| ·质粒的双酶切反应 | 第39页 |
| ·质粒双酶切产物的回收与纯化 | 第39-40页 |
| ·2TMV3克隆的构建与鉴定 | 第40-44页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第40-42页 |
| ·PCR扩增目的基因片段与克隆载体的连接 | 第42页 |
| ·重组质粒大量提取纯化过程 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的酶切鉴 | 第43-44页 |
| ·3TMV1克隆的构建与鉴定 | 第44-46页 |
| ·3TMV1片段2TMV1-N7的PCR合成 | 第44页 |
| ·PCR扩增目的基因片段与载体PBM-19的连接 | 第44-45页 |
| ·重组质粒PBM-19-3TMV1的转化 | 第45页 |
| ·重组质粒PBM-19-3TMV1的鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒PBM-19-3TMV1的胶回收 | 第45页 |
| ·克隆载体的连接 | 第45-46页 |
| ·重组质粒3TMV1的鉴定 | 第46页 |
| ·农杆菌GV3101生长条件的测定 | 第46-47页 |
| ·农杆菌GV3101生长曲线的制定 | 第47页 |
| ·农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| ·2TMV3重组质粒大提过程 | 第48-49页 |
| ·电击转化农杆菌 | 第49页 |
| ·农杆菌中重组克隆的鉴定 | 第49-50页 |
| ·农杆菌GV3101重组质粒的提取 | 第49-50页 |
| ·农杆菌GV3101重组质粒的鉴定 | 第50页 |
| ·将携带重组质粒的农杆菌注射烟草 | 第50-51页 |
| ·纯化烟草中的HR212蛋白 | 第51页 |
| ·Western blot检测 | 第51-54页 |
| ·结果 | 第54-63页 |
| ·密码子的优化 | 第54-55页 |
| ·mRNA二级结构的优化 | 第55页 |
| ·克隆2TMV3 | 第55-59页 |
| ·克隆3TMV1 | 第59-60页 |
| ·GV3101生长条件的测定 | 第60-61页 |
| ·GV3101生长曲线的测定 | 第61页 |
| ·电转化条件的测定 | 第61-62页 |
| ·TMV感染烟草 | 第62-63页 |
| ·Western blot | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第三章 HIV-1假病毒包装及其重要影响因素的分析 | 第65-74页 |
| ·材料与方法 | 第65-68页 |
| ·质粒、细胞以及试剂 | 第65-66页 |
| ·影响HIV-1假病毒活性的一些因素分析的试验方法 | 第66-68页 |
| ·不同转染试剂包装HIV-1假病毒的转染方案 | 第66-67页 |
| ·使用PEI转染时,质粒与转染试剂合理比例的优化 | 第67页 |
| ·血清来源对于病毒包装效果的影响 | 第67页 |
| ·293T细胞同期化以及假病毒包装 | 第67-68页 |
| ·假病毒活性的测定方法 | 第68页 |
| ·数据归一化以及统计分析 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-72页 |
| ·不同转染试剂包装的HIV-1假病毒的效果统计 | 第68-69页 |
| ·使用PEI包装时转染试剂与质粒的比例对病毒包装的影响 | 第69-72页 |
| ·固定PEI浓度时,固定不同质粒数量的病毒包装效果 | 第69页 |
| ·固定PEI浓度时,不同PEI量对包装效果的影响 | 第69-70页 |
| ·使用PEI批量包装的结果 | 第70页 |
| ·血清类型对于病毒包装效果的影响 | 第70-71页 |
| ·HEK-293T细胞的周期与病毒包装的关系 | 第71-72页 |
| ·讨论与分析 | 第72-74页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第74-76页 |
| ·分析与讨论 | 第74-75页 |
| ·展望 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录一：英文缩写词表 | 第85-86页 |
| 附录二：293T细胞的周期分析 | 第86-89页 |
