| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 1. 实验材料 | 第16-20页 |
| ·细胞系 | 第16页 |
| ·引物序列 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16-17页 |
| ·试剂盒 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂配制 | 第18-20页 |
| ·5×TBE | 第18页 |
| ·NS和PPP2R5A及内参引物储备液 | 第18页 |
| ·DAB底物工作液 | 第18-19页 |
| ·磷酸盐缓冲液(PBS液) | 第19页 |
| ·PPP2R5A的siRNA浓缩液 | 第19页 |
| ·1.5%的琼脂糖凝胶 | 第19-20页 |
| 2. 实验方法 | 第20-27页 |
| ·细胞培养 | 第20页 |
| ·细胞转染siRNA-PPP2R5A抑制PPP2R5A基因 | 第20-21页 |
| ·PCR法从mRNA水平检测细胞转染效果 | 第21-23页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第21-22页 |
| ·将所提取的RNA进行纯度及完整性鉴定 | 第22页 |
| ·调整RNA浓度一致并进行反转录实验合成cDNA | 第22-23页 |
| ·PCR法检测转染前后mRNA的含量变化 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测PCR的扩增产物 | 第23页 |
| ·免疫细胞化学法检测siRNA-PPP2R5A转染前后PPP2R5A蛋白表达含量的变化 | 第23-25页 |
| ·制备细胞涂片 | 第24页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第24-25页 |
| ·细胞瑞-吉染色前后观察细胞形态及胞内结构的变化 | 第25页 |
| ·细胞周期测定 | 第25页 |
| ·细胞凋亡测定 | 第25-27页 |
| 3. 结果判断 | 第27-29页 |
| ·RT-PCR结果判断 | 第27页 |
| ·免疫细胞化学染色的结果判断 | 第27页 |
| ·流式细胞仪检测凋亡细胞的判断 | 第27-28页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期的判断 | 第28-29页 |
| 4. 实验结果 | 第29-40页 |
| ·所提总RNA纯度和完整性 | 第29页 |
| ·三种细胞系PPP2R5A的表达情况 | 第29-30页 |
| ·siRNA-PPP2R5A转染后PPP2R5A-mRNA的抑制效果 | 第30-31页 |
| ·活体细胞生长状态 | 第31-33页 |
| ·siRNA-PPP2R5A转染后PPP2R5A蛋白表达变化 | 第33-35页 |
| ·siRNA-PPP2R5A转染后细胞形态学变化 | 第35-36页 |
| ·siRNA-PPP2R5A转染后细胞周期改变 | 第36-38页 |
| ·siRNA-PPP2R5A转染后细胞凋亡检测 | 第38-40页 |
| 5. 讨论 | 第40-46页 |
| ·PPP2R5A与细胞生长状态和形态学的变化 | 第40页 |
| ·PPP2R5A与细胞凋亡 | 第40-42页 |
| ·PPP2R5A与细胞周期 | 第42-43页 |
| ·PPP2R5A和NS之间的关系 | 第43-44页 |
| ·关于RNA干扰 | 第44-46页 |
| 6.结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 综述 | 第49-64页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 个人简历 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
