| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| ·乳酸菌简介 | 第14页 |
| ·乳酸菌食品级诱导表达系统简介 | 第14-23页 |
| ·乳酸链球菌素(Nisin)简介 | 第14-15页 |
| ·Nisin基因簇上的启动子的结构与功能分析 | 第15-18页 |
| ·利用Nisin生物合成启动子进行基因的可控表达 | 第18-19页 |
| ·NICE(Nisin controlled expression system)常用宿主菌 | 第19-20页 |
| ·本实验所用载体介绍 | 第20-21页 |
| ·利用NICE系统表达外源蛋白总结 | 第21-23页 |
| ·外源蛋白在乳酸乳球菌分泌机制研究 | 第23-28页 |
| ·乳酸乳球菌表达的部分重组蛋白及其细胞定位 | 第23-26页 |
| ·部分重组蛋白分泌情况比较 | 第26-28页 |
| ·外源蛋白其他定位方式——细胞壁锚定 | 第28页 |
| ·乳酸菌表达系统存在问题及对策 | 第28-29页 |
| ·发酵条件 | 第28-29页 |
| ·密码子偏好性 | 第29页 |
| ·乳酸菌表达系统前景和展望 | 第29-30页 |
| 第二章 人β-干扰素在乳酸乳球菌中的分泌表达及活性测定 | 第30-90页 |
| ·引言 | 第30-48页 |
| ·先天免疫应答与炎症损伤 | 第30-36页 |
| ·细胞因子在溃疡性结肠炎中的作用 | 第36-39页 |
| ·人β-干扰素研究 | 第39-43页 |
| ·IFN-β与溃疡性结肠炎 | 第43-45页 |
| ·IFN-β蛋白晶体结构和基因序列 | 第45-48页 |
| ·实验材料 | 第48-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·主要试剂配方 | 第49-54页 |
| ·主要实验仪器 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-73页 |
| ·ifn-β 16(17位Cys突变为Ser)基因构建 | 第55-61页 |
| ·乳酸乳球菌重组表达载体构建 | 第61-66页 |
| ·IFN-β 1b在重组菌株中的诱导表达分析 | 第66-67页 |
| ·Western blot、ELISA检测重组蛋白 | 第67-71页 |
| ·重组IFN-β生物学活性检测 | 第71-73页 |
| ·实验结果 | 第73-87页 |
| ·pMD18-T-IFNb载体构建 | 第73-74页 |
| ·pSee-IFNb和pSec-LEISS-IFNb载体构建 | 第74-78页 |
| ·重组菌株Nisin梯度诱导生长曲线分析 | 第78-79页 |
| ·乳酸乳球菌NZ9000/pSec-IFNb菌株胞内重组蛋白Western blot分析 | 第79-80页 |
| ·乳酸乳球菌NZ9000/pSec-IFNb和pSec-LEISS-IFNb菌株胞内重组蛋白Western blot分析 | 第80-81页 |
| ·ELISA定量测定重组IFN-β蛋白 | 第81-85页 |
| ·重组IFN-β生物活性测定 | 第85-87页 |
| ·结果讨论 | 第87-89页 |
| ·本章小结 | 第89-90页 |
| 第三章 大肠杆菌O157:H7 espA在乳酸乳球菌中的表达 | 第90-132页 |
| ·引言 | 第90-104页 |
| ·大肠杆菌O157:H7主要生物学特征 | 第90页 |
| ·大肠杆菌O157:H7主要毒力因子和致病机理 | 第90-96页 |
| ·保护性免疫 | 第96-98页 |
| ·EspA蛋白相关介绍 | 第98-104页 |
| ·实验材料 | 第104-106页 |
| ·菌株、质粒和实验动物 | 第104页 |
| ·主要试剂 | 第104页 |
| ·培养基 | 第104页 |
| ·主要试剂配方 | 第104-106页 |
| ·主要实验仪器 | 第106页 |
| ·实验方法 | 第106-115页 |
| ·espA基因克隆 | 第106-109页 |
| ·大肠杆菌重组表达载体(pET-15b-espA)构建 | 第109-111页 |
| ·EspA蛋白在大肠杆菌诱导表达 | 第111-112页 |
| ·乳酸菌重组表达载体构建 | 第112-114页 |
| ·EspA蛋白在乳酸乳球菌重组菌株中的诱导表达分析 | 第114页 |
| ·动物免疫实验 | 第114-115页 |
| ·实验结果 | 第115-132页 |
| ·pMD18-T-espA载体构建 | 第115-117页 |
| ·pET-15b-espA载体构建 | 第117-118页 |
| ·pSec-espA载体构建 | 第118-120页 |
| ·pSec-LEISS-espA载体构建 | 第120页 |
| ·重组载体测序分析 | 第120-124页 |
| ·重组EspA蛋白在E.coli中诱导表达及Western blot分析 | 第124-126页 |
| ·乳酸乳球菌NZ9000/pSec-espA和pSec-LEISS-espA重组菌株胞内重组蛋白Western blot分析 | 第126-127页 |
| ·动物免疫实验 | 第127-132页 |
| 参考文献 | 第132-162页 |
| 致谢 | 第162-163页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第163-164页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第164页 |
