禽流感血凝素融合基因表达载体的构建及其在烟草和百脉根中的表达
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| ·禽流感国内外发生状况 | 第12-13页 |
| ·禽流感概述 | 第12页 |
| ·禽流感的暴发 | 第12-13页 |
| ·禽流感血凝素 | 第13-15页 |
| ·禽流感疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
| ·植物生物反应器 | 第16-20页 |
| ·转基因植物可饲用疫苗的优势 | 第18页 |
| ·转基因植物可饲用疫苗研究进展 | 第18-20页 |
| ·影响外源基因表达的因素 | 第20-22页 |
| ·整合位点 | 第20-21页 |
| ·整合拷贝数 | 第21-22页 |
| ·外源基因的特性及其在整合位点上的完整性 | 第22页 |
| ·外源基因遗传的稳定性 | 第22页 |
| ·提高表达量采用的主要途径和策略 | 第22-25页 |
| ·构建含 MARs 的表达载体 | 第23-24页 |
| ·构建含引导肽的载体 | 第24页 |
| ·其它提高表达效率的策略 | 第24-25页 |
| ·目的及意义 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-42页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·菌种与质粒 | 第27页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-29页 |
| ·引物、酶及生化试剂 | 第29-30页 |
| ·其它试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第31页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 DNA | 第31-32页 |
| ·DNA 的回收 | 第32页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第32页 |
| ·载体的构建 | 第32-34页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第34-35页 |
| ·植物的遗传转化 | 第35-36页 |
| ·百脉根的遗传转化 | 第35-36页 |
| ·植物基因组 DNA 提取 | 第36页 |
| ·RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·PCR 检测 | 第37页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第37-39页 |
| ·Western Blot 检测 | 第39-42页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第42-68页 |
| ·结果 | 第42-65页 |
| ·载体构建 | 第42-55页 |
| ·含有表达载体的农杆菌 PCR 检测 | 第55页 |
| ·根癌农杆菌介导的植物转化 | 第55-57页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第57-65页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第57-58页 |
| ·转基因植株的 RT-PCR 检测 | 第58-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| ·MAR 的作用 | 第65-66页 |
| ·百脉根适宜做植物生物反应器 | 第66页 |
| ·禽流感血凝素基因与 GFP 的融合表达 | 第66页 |
| ·禽流感血凝素基因表达的亚细胞定位 | 第66-67页 |
| ·外源蛋白的下游加工问题 | 第67-68页 |
| 第四章 结论 | 第68-70页 |
| ·禽流感血凝素基因高效表达载体的构建 | 第68页 |
| ·得到了一批转基因烟草和百脉根植株 | 第68页 |
| ·首次发现了 HA 的细胞定位作用 | 第68-69页 |
| ·显著提高了外源蛋白的表达水平 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 在读期间发表论文及申请专利 | 第82-83页 |
| 作者简历 | 第83页 |
