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细胞周期因子Geminin在斑马鱼体节发生中作用的研究

中文摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
1 前言第11-26页
   ·体节研究背景和进展第11-22页
     ·体节发生的过程和特点第11-13页
     ·体节发生的模型研究第13-16页
     ·体节发生的分子调控途径第16-22页
   ·细胞周期因子Gem在细胞周期和发育中的作用第22-25页
     ·细胞周期因子Geminin在细胞周期的作用第22-24页
     ·细胞周期因子Geminin在胚胎发育中的作用第24-25页
   ·目的和预期结果第25-26页
2 材料和方法第26-42页
   ·实验动物及饲养第26页
   ·试剂、耗材和仪器第26-27页
   ·培养基和有关主要试剂的配置第27-30页
     ·LB培养基的配制:第27页
     ·10×TBE琼脂糖凝胶电泳缓冲液的配制第27页
     ·30×Danieau's solution(PH7.6)第27-28页
     ·western blot相关溶液的配制第28-29页
     ·原位杂交相关溶液配制:第29-30页
     ·cell death杂交溶液的配制第30页
     ·antibody staining相关溶液的配制第30页
     ·其他相关溶液配制第30页
   ·质粒和菌株第30页
   ·实验方法第30-42页
     ·斑马鱼总RNA的提取第30-31页
     ·反转录制备cDNA第31-32页
     ·重组质粒的构建第32-35页
     ·反义探针的制备第35-36页
     ·胚胎注射和细胞移植第36-37页
     ·全胚胎原位杂交(Whole mount in situ hybridization)第37-40页
     ·整胚抗体显色反应(whole mount antibody staing)第40页
     ·细胞凋亡原位杂交第40-41页
     ·Western Blot第41-42页
3 实验结果第42-57页
   ·Gem MO阻断Geminin的翻译第42页
   ·Geminin在早期胚胎中的表达模式第42-43页
   ·Gem通过调控细胞周期调控了体节发生频率第43-47页
   ·Gem通过调控RA—FGF8的表达来调控体节大小的发生第47-49页
   ·Gem通过Mib依赖与非依赖性两种方式调控体节发生的Notch信号途径第49-53页
   ·Gem在体节形成过程中体节极性分化和细胞的间充质—表皮化转换的作用(MET)第53-54页
   ·Notch在振荡基因协调表达中起主导作用,而PSM区域细胞周期变化与振荡基因协调表达没紧密联系第54-57页
4 讨论第57-62页
   ·Gem MO导致的体节发生延迟与体节发生的细胞周期模型第57-58页
   ·Gem对体节发生中反向浓度梯度RA和FGF8的调控。第58-59页
   ·细胞周期、Notch信号途径与体节发生时钟基因表达的关系。第59-60页
   ·Gem在体节发生中的调控方式和调控路线。第60-62页
5 结论第62-63页
6 展望及欲开展工作第63-64页
参考文献第64-74页
致谢第74页

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