| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-12页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-16页 |
| 实验仪器与试剂 | 第16-19页 |
| 第一部分 血浆APC基因甲基化定量检测方法的建立 | 第19-42页 |
| 一、材料和方法 | 第20-29页 |
| 1 样本的收集和细胞的培养 | 第20页 |
| 2 脐带血单个核细胞分离 | 第20-21页 |
| 3 酚/氯仿抽提法提取DNA | 第21页 |
| 4 DNA浓度和纯度的检测 | 第21-22页 |
| 5 甲基化阳性和阴性质控品的制备 | 第22页 |
| 6 亚硫酸氢盐修饰后测序法 | 第22-23页 |
| 7 TA克隆测序 | 第23-24页 |
| 8 模拟肺癌患者血浆的制备 | 第24页 |
| 9 磁珠法提取血浆DNA | 第24-25页 |
| 10 DNA的亚硫酸氢盐化学修饰 | 第25-26页 |
| 11 实时荧光定量MSP方法的建立 | 第26-28页 |
| 12 实时荧光定量MSP标准曲线的制定 | 第28页 |
| 13 实时荧光定量MSP特异性、重复性和准确性实验 | 第28-29页 |
| 14 普通MSP、荧光定量MSP(SYBRGreenⅠ)和实时荧光定量MSP的方法检测灵敏度的比较 | 第29页 |
| 二、实验结果 | 第29-37页 |
| 1 CB+及NCI-H460单个克隆细胞株APC基因甲基化的MSP鉴定 | 第30页 |
| 2 APC基因启动子区克隆测序的结果 | 第30-31页 |
| 3 实时荧光定量MSP的反应条件的确定和优化 | 第31-32页 |
| 4 实时荧光定量MSP的标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| 5 实时荧光定量MSP的特异性、重复性和准确性结果 | 第33-35页 |
| 6 检测敏感性比较 | 第35-37页 |
| 三、分析讨论 | 第37-42页 |
| 第二部分 早期肺癌患者血浆中APC基因甲基化定量检测 | 第42-53页 |
| 一、材料与方法 | 第43-46页 |
| 1 研究对象 | 第43-44页 |
| 2 实体瘤患者和健康对照者血浆的分离 | 第44页 |
| 3 模拟肺癌患者标准品血浆的制备 | 第44页 |
| 4 磁珠法提取血浆DNA | 第44-45页 |
| 5 DNA的亚硫酸氢盐化学修饰 | 第45页 |
| 6 实时荧光定量MSP中的质控品 | 第45页 |
| 7 实时荧光定量MSP对修饰后的血浆DNA进行检测 | 第45-46页 |
| 二、实验结果 | 第46-49页 |
| 1 实时荧光定量MSP中的质控品的建立 | 第46页 |
| 2 早期肺癌患者血浆中APC基因甲基化检测结果 | 第46-49页 |
| 三、分析讨论 | 第49-53页 |
| 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 综述 | 第63-73页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 发表论文 | 第73-76页 |
