| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| ·邻苯二酚 | 第11-14页 |
| ·邻苯二酚的应用及生产现状 | 第11-12页 |
| ·化学法合成邻苯二酚 | 第12页 |
| ·生物法合成邻苯二酚 | 第12-14页 |
| ·苯甲酸钠 | 第14-18页 |
| ·苯甲酸盐降解代谢途径 | 第14-18页 |
| ·固定化细胞技术 | 第18-20页 |
| ·固定化载体 | 第18-19页 |
| ·有载体固定化细胞 | 第18页 |
| ·无载体固定化细胞 | 第18-19页 |
| ·固定化细胞的制备方法 | 第19-20页 |
| ·吸附法 | 第19页 |
| ·包埋法 | 第19页 |
| ·共价结合法 | 第19-20页 |
| ·变联法 | 第20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-39页 |
| ·试验材料 | 第22-25页 |
| ·土壤样品来源 | 第22页 |
| ·菌株与质粒 | 第22-23页 |
| ·培养基及培养条件 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·培养条件 | 第23-24页 |
| ·菌体保存 | 第24页 |
| ·抗生素 | 第24页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-39页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第25-27页 |
| ·快速碱裂解法提取质粒 | 第25页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第25-26页 |
| ·试剂盒大量提质粒 | 第26-27页 |
| ·试剂盒快速提取质粒 | 第27页 |
| ·细菌总DNA的蛋白酶/SDS提取法 | 第27-28页 |
| ·DNA的酶切、电泳及DNA片段浓度测算 | 第28-29页 |
| ·DNA酶切 | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·DNA片段浓度测算 | 第29页 |
| ·DNA片段的回收 | 第29-31页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶法 | 第29-30页 |
| ·电透析法回收DNA片段 | 第30-31页 |
| ·试剂盒法快速回收DNA片段 | 第31页 |
| ·DNA的连接 | 第31-32页 |
| ·载体质粒DNA的去磷酸化 | 第31-32页 |
| ·DNA连接 | 第32页 |
| ·质粒DNA以及DNA连接产物的转化 | 第32-33页 |
| ·CaCl_2法快速制备E.coli的感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·电脉冲转化 | 第33页 |
| ·PCR扩增DNA片段 | 第33-34页 |
| ·Cosmid文库的构建和筛选 | 第34-36页 |
| ·文库的构建 | 第34-35页 |
| ·文库的筛选 | 第35页 |
| ·文库的保存 | 第35-36页 |
| ·DNA-DNA杂交 | 第36-38页 |
| ·Southern转移 | 第36页 |
| ·探针标记一随机引物标记 | 第36-37页 |
| ·Southern杂交 | 第37-38页 |
| ·邻苯二酚的测定 | 第38-39页 |
| 第三章 产邻苯二酚菌株的筛选鉴定与特性研究 | 第39-49页 |
| ·产邻苯二酚细菌的分离和筛选 | 第39页 |
| ·产邻苯二酚菌株的筛选 | 第39页 |
| ·复筛 | 第39页 |
| ·菌株B3-1的抗生素抗性检测 | 第39-40页 |
| ·菌株B3-1生长和产邻苯二酚的最佳条件 | 第40-43页 |
| ·不同苯甲酸钠浓度的影响 | 第40-41页 |
| ·最适生长温度及邻苯二酚的产量 | 第41-43页 |
| ·菌种鉴定 | 第43-48页 |
| ·菌落形态与生理生化特征 | 第43页 |
| ·16SrDNA序列分析 | 第43页 |
| ·PCR扩增 | 第43-48页 |
| ·PCR产物的连接与转化 | 第45页 |
| ·PCR扩增产物的测序 | 第45-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 固定化细胞生产邻苯二酚 | 第49-56页 |
| ·固定化方法和材料的选择 | 第49页 |
| ·固定化单因子条件优化 | 第49-52页 |
| ·海藻酸钠浓度对邻苯二酚产量的影响 | 第50页 |
| ·氯化钙浓度对邻苯二酚产量的影响 | 第50-51页 |
| ·固定化时间对邻苯二酚产量的影响 | 第51-52页 |
| ·包埋的菌体量对邻苯二酚产量的影响 | 第52页 |
| ·正交实验 | 第52-54页 |
| ·固定化细胞性能的改进与提高 | 第54-55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 B3-1基因文库的构建与苯甲酸钠双加氧酶基因簇的克隆 | 第56-72页 |
| ·基因文库的构建 | 第56-58页 |
| ·假单胞菌B3-1总DNA的提取 | 第57-58页 |
| ·B3-1基因文库的构建 | 第58页 |
| ·苯甲酸钠双加氧酶基因簇的克隆 | 第58-64页 |
| ·文库的筛选 | 第58-59页 |
| ·苯甲酸钠双加氧酶基因簇的克隆 | 第59-64页 |
| ·Southern杂交 | 第64-69页 |
| ·序列拼接与分析 | 第69-72页 |
| 第六章 总结与讨论 | 第72-74页 |
| ·本论文的工作总结 | 第72-73页 |
| ·筛选到一株产邻苯二酚的菌株B3-1 | 第72页 |
| ·建立并优化了Pseudomonas sp B3-1生产邻苯二酚的固定化反应体系 | 第72页 |
| ·构建了Pseudomonas sp B3-1的基因组文库 | 第72页 |
| ·克隆了苯甲酸双加氧酶基因簇的两个基因 | 第72-73页 |
| ·本研究的后续工作 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
