| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 第一章 综述 | 第16-23页 |
| §1.1 引言 | 第16页 |
| §1.2 中心蛋白的种类 | 第16页 |
| §1.3 中心蛋白的结构 | 第16-18页 |
| §1.4 中心蛋白的定位 | 第18页 |
| §1.5 中心蛋白的功能 | 第18-21页 |
| ·绿藻中心蛋白 | 第18-19页 |
| ·酵母中心蛋白 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物细胞中心蛋白 | 第20页 |
| ·高等植物中心蛋白 | 第20页 |
| ·原生生物中心蛋白 | 第20-21页 |
| §1.6 中心蛋白的作用机制 | 第21页 |
| §1.7 课题的研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 中心蛋白N端突变体的构建、表达和纯化 | 第23-41页 |
| §2.1 引言 | 第23页 |
| §2.2 材料 | 第23-28页 |
| ·菌种与质粒 | 第23页 |
| ·寡核苷酸 | 第23-24页 |
| ·主要酶及生化试剂 | 第24页 |
| ·主要试剂配制过程 | 第24-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| §2.3 方法 | 第28-37页 |
| ·N-端单天冬氨酸突变体重组质粒(pGEM-T-Easy-N-D37K)的构建 | 第28-32页 |
| ·N-端单天冬氨酸突变体重组质粒(pGEM-T-Easy-N-D73K)的构建 | 第32-35页 |
| ·重组菌N-D37K和N-D73K的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第35-37页 |
| §2.4 结果与讨论 | 第37-40页 |
| ·突变重组质粒的酶切鉴定和测序结果 | 第37-39页 |
| ·重组菌N-D37K和N-D73K的诱导表达及纯化 | 第39-40页 |
| §2.5 本章结论 | 第40-41页 |
| 第三章 中心蛋白N端突变体的金属结合性质 | 第41-47页 |
| §3.1 引言 | 第41页 |
| §3.2 材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| §3.3 方法 | 第41-42页 |
| ·脱钙蛋白溶液的制备 | 第41-42页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第42页 |
| ·Tb~(3+)储备液的配制 | 第42页 |
| ·荧光光谱测定 | 第42页 |
| §3.4 结果与讨论 | 第42-46页 |
| ·突变蛋白的变性胶电泳和天然胶电泳分析 | 第42-43页 |
| ·中心蛋白N端及其突变体的Tb~(3+)荧光敏化 | 第43-44页 |
| ·Tb~(3+)与N-D37K和N-D73K结合常数的计算 | 第44-45页 |
| ·Ca~(2+)与中心蛋白及其突变体结合常数的计算 | 第45-46页 |
| §3.5 本章结论 | 第46-47页 |
| 第四章 中心蛋白N端及其突变体的构象变化 | 第47-54页 |
| §4.1 引言 | 第47页 |
| §4.2 材料 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| §4.3 方法 | 第47-48页 |
| ·脱钙蛋白溶液的制备 | 第47页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第47页 |
| ·Tb~(3+)储备液的配制 | 第47页 |
| ·TNS溶液的配制 | 第47-48页 |
| ·圆二色谱的测定 | 第48页 |
| ·荧光光谱测定 | 第48页 |
| §4.4 结果与讨论 | 第48-53页 |
| ·中心蛋白N端及其突变体的Far-UV CD谱 | 第48页 |
| ·TNS检测的金属离子诱导的蛋白构象变化 | 第48-51页 |
| ·中心蛋白N端及其突变体和TNS结合常数的测定 | 第51-52页 |
| ·Tb~(3+)滴定TNS饱和蛋白的荧光分析 | 第52-53页 |
| §4.5 本章结论 | 第53-54页 |
| 第五章 中心蛋白N端及其突变体的聚集性质 | 第54-64页 |
| §5.1 引言 | 第54页 |
| §5.2 材料 | 第54-55页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| §5.3 方法 | 第55页 |
| ·脱钙蛋白溶液的制备 | 第55页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第55页 |
| ·Tb~(3+)储备液的配制 | 第55页 |
| ·荧光共振光散射光谱的测定 | 第55页 |
| ·蛋白化学交联分析 | 第55页 |
| §5.4 结果与讨论 | 第55-63页 |
| ·浓度对中心蛋白N端聚集的影响 | 第55-56页 |
| ·温度对中心蛋白N端聚集的影响 | 第56-58页 |
| ·其他物理化学因素对中心蛋白N端聚集的影响 | 第58-60页 |
| ·金属离子诱导的中心蛋白N端及其突变体的聚集 | 第60-61页 |
| ·中心蛋白N端及其突变体的聚集的化学交联分析 | 第61-63页 |
| §5.5 本章结论 | 第63-64页 |
| 第六章 中心蛋白N端金属离子结合性质的电化学研究 | 第64-72页 |
| §6.1 引言 | 第64页 |
| §6.2 材料 | 第64-65页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64-65页 |
| §6.3 方法 | 第65页 |
| ·Eu~(3+)储备液的配制 | 第65页 |
| ·脱钙蛋白溶液的制备 | 第65页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第65页 |
| ·电化学实验 | 第65页 |
| §6.4 结果与讨论 | 第65-71页 |
| ·Eu~(3+)与小分子配位的电化学行为 | 第65-69页 |
| ·Eu~(3+)与中心蛋白N-EoCen配位的电化学行为 | 第69-71页 |
| §6.5 本章结论 | 第71-72页 |
| 第七章 总结与展望 | 第72-74页 |
| §7.1 总结 | 第72-73页 |
| §7.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简况及联系方式 | 第82-84页 |
