| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| 1.聚醚类抗生素 | 第11-12页 |
| ·简介 | 第11页 |
| ·聚醚类抗生素的作用机理和化学合成 | 第11-12页 |
| ·聚醚类抗生素的产生菌 | 第12页 |
| 2.莫能菌素 | 第12-19页 |
| ·莫能菌素的化学结构及性质 | 第12-13页 |
| ·莫能菌素的生物合成 | 第13-14页 |
| ·莫能菌素分子生物学研究进展 | 第14-19页 |
| ·概述 | 第14-15页 |
| ·莫能菌素的前体合成 | 第15-18页 |
| ·ccr(丁烯酰辅酶A还原酶基因) | 第18页 |
| ·meaA(甲基丙二酰CoA基因),icm(异丁酰辅酶A的异构酶基因) | 第18页 |
| ·monBⅠ,monBⅡ(异构酶基因) | 第18页 |
| ·monH,monRⅠ,monRⅡ(转录调节基因) | 第18-19页 |
| 3.抗生素合成的调控 | 第19-22页 |
| ·途径专一性调控 | 第19页 |
| ·抗生素合成的全局调控 | 第19页 |
| ·双组份调控 | 第19页 |
| ·nsdA基因简介 | 第19-20页 |
| ·本课题立题依据及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-32页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·菌株 | 第22-23页 |
| ·质粒 | 第23页 |
| ·PCR引物 | 第23-24页 |
| ·培养基和生化试剂 | 第24-26页 |
| ·仪器设备 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-32页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量提取(碱裂解法) | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及质粒的热激转化 | 第27页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第27页 |
| ·链霉菌总DNA的少量快速提取 | 第27-28页 |
| ·PCR | 第28页 |
| ·DNA片段的回收 | 第28-29页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第29页 |
| ·DNA连接 | 第29页 |
| ·PCR介导的定向基因置换技术 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌与链霉菌之间的属间孢子接合转移 | 第30-31页 |
| ·发酵培养 | 第31页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第31页 |
| ·莫能菌素效价的测定 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-49页 |
| ·大肠杆菌-肉桂地链霉菌BIB2005接合转移系统的建立和优化 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌—肉桂地链霉菌BIB2005属间接合转移,本研究尝试了以下方法 | 第32-33页 |
| ·基因中断和基因置换的基本原理 | 第33-34页 |
| ·PCR介导的基因中断和基因置换的基本原理 | 第34-37页 |
| ·nsdA基因中断载体的构建 | 第37-41页 |
| ·肉桂地链霉菌负调控基因nsdA的检测。 | 第37页 |
| ·PCR克隆nsdA及两侧基因 | 第37-39页 |
| ·肉桂地链霉菌nsdA基因序列分析 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增两侧与nsdA基因同源的抗性标记 | 第40-41页 |
| ·nsdA基因置换载体的构建 | 第41-44页 |
| ·将PCR回收产物装载在AT载体,构建pBIB906 | 第41-42页 |
| ·重新构建置换载体 | 第42页 |
| ·筛选转化子 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的PCR验证 | 第43-44页 |
| ·pBIB929通过接合转移导入肉桂地链霉菌。 | 第44页 |
| ·筛选双交换菌株 | 第44-45页 |
| ·筛选 | 第44-45页 |
| ·nsdA基因中断的PCR验证 | 第45-46页 |
| ·nsdA基因中断菌株的生物表型 | 第46-47页 |
| ·nsdA中断株发酵分析 | 第47-49页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第49-52页 |
| ·总结 | 第49页 |
| ·构建并优化了大肠杆菌-肉桂地链霉菌接合转移系统 | 第49页 |
| ·首次克隆了肉桂地链霉菌nsdA基因,并完成nsdA全基因组测序。 | 第49页 |
| ·肉桂地链霉菌nsdA基因的中断。 | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·关于接合转移体系的构建 | 第49-50页 |
| ·关于基因中断载体的构建 | 第50页 |
| ·关于电转化 | 第50-51页 |
| ·关于nsdA基因的中断 | 第51页 |
| ·展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
