| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-20页 |
| 1. 我国土壤盐渍化现状 | 第11页 |
| 2. 植物耐逆机理研究及进展 | 第11-12页 |
| 3. 拟南芥在耐逆研究中的应用 | 第12-15页 |
| ·拟南芥的生物学及遗传学特性 | 第12页 |
| ·拟南芥突变体库的建立 | 第12-14页 |
| ·突变体的筛选方法及表型鉴定 | 第14-15页 |
| ·突变体的筛选方法 | 第14-15页 |
| ·拟南芥耐逆突变体表型鉴定 | 第15页 |
| 4. 植物种子胚胎发育的研究 | 第15-19页 |
| ·核糖核酸酶的研究现状 | 第15-17页 |
| ·胚胎发育的遗传学与分子控制 | 第17-19页 |
| ·母体效应基因 | 第17-19页 |
| ·父体效应基因 | 第19页 |
| 5. 研究意义及展望 | 第19-20页 |
| 第二部分 实验论文 | 第20-49页 |
| 一、实验材料和方法 | 第20-39页 |
| 1 实验材料 | 第20-27页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·质粒载体及菌种 | 第20-21页 |
| ·质粒载体 | 第20页 |
| ·菌种 | 第20-21页 |
| ·酶及化学试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·引物序列 | 第22-23页 |
| ·克隆基因的启动子及基因序列所用引物名称及序列 | 第22-23页 |
| ·T-DNA 插入突变体基因型鉴定引物名称及序列 | 第23页 |
| ·实时定量PCR 引物名称及序列 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·常用试剂的配制方法 | 第24-27页 |
| ·常用抗生素配制 | 第27页 |
| ·分析软件 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-39页 |
| ·拟南芥突变体筛选实验技术 | 第27-29页 |
| ·种子的灭菌消毒及培养方法 | 第27-28页 |
| ·种子的灭菌消毒方法 | 第27-28页 |
| ·种子的接种及培养方法 | 第28页 |
| ·筛选条件的确立 | 第28页 |
| ·突变体的筛选 | 第28页 |
| ·突变体的鉴定 | 第28-29页 |
| ·基本分子生物学实验技术 | 第29-36页 |
| ·PCR 克隆目的基因 | 第29-30页 |
| ·T-DNA 插入突变体基因型鉴定 | 第30页 |
| ·CTAB 小量法提取植物总DNA | 第30页 |
| ·Trizon 法提取拟南芥总RNA(小量法) | 第30-31页 |
| ·热硼酸盐法提取拟南芥种子中的RNA | 第31-32页 |
| ·反转录PCR | 第32页 |
| ·GeneClean 方法从琼脂糖凝胶上回收DNA 片段 | 第32-33页 |
| ·连接反应 | 第33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaC12 法) | 第33-34页 |
| ·质粒向大肠杆菌中的转化(热激法) | 第34页 |
| ·质粒的提取 | 第34页 |
| ·质粒酶切检测 | 第34-35页 |
| ·双酶切目的片段和载体（3301,3301-GFP）质粒 | 第35页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第35页 |
| ·农杆菌感受态的制备及质粒的转化 | 第35-36页 |
| ·花序浸染法转化拟南芥 | 第36-37页 |
| ·植物材料的种植 | 第36页 |
| ·菌液制备渗透操作 | 第36页 |
| ·渗透转化 | 第36-37页 |
| ·转化子的筛选 | 第37页 |
| ·PCR 验证 | 第37页 |
| ·拟南芥花粉活力测定 | 第37-38页 |
| ·花粉A1exander 染色 | 第37页 |
| ·花粉体外萌发培养 | 第37-38页 |
| ·拟南芥种子胚胎发育的观察 | 第38页 |
| ·实验材料的准备 | 第38页 |
| ·种子的脱色处理 | 第38页 |
| ·不同处理下的拟南芥中各基因的表达变化 | 第38-39页 |
| ·拟南芥的处理 | 第38-39页 |
| ·实时定量PCR 引物设计 | 第39页 |
| ·定量PCR | 第39页 |
| 二、实验结果与分析 | 第39-47页 |
| 1 拟南芥耐盐突变体的筛选 | 第39-40页 |
| ·拟南芥耐盐突变体筛选条件的确立 | 第39页 |
| ·突变体的筛选 | 第39-40页 |
| ·突变体的复筛 | 第40页 |
| 2. 突变体的鉴定 | 第40-42页 |
| ·T-DNA 位点验证及纯合体鉴定 | 第40-41页 |
| ·突变体表型的鉴定 | 第41-42页 |
| 3. 载体的构建 | 第42-45页 |
| ·各基因的启动子序列的获得 | 第42页 |
| ·各基因的全长序列的获得 | 第42-43页 |
| ·目的片段与载体的连接转化 | 第43页 |
| ·目的片段与载体的双酶切 | 第43-44页 |
| ·目的片段与载体连接后的转化及验证 | 第44-45页 |
| ·转基因苗的筛选 | 第45页 |
| 4.花粉染色及花粉体外萌发活力的测定 | 第45-46页 |
| ·花粉染色 | 第45页 |
| ·花粉体外萌发活力的测定 | 第45-46页 |
| 5.种子的胚胎发育 | 第46-47页 |
| 6.实时定量 PCR 结果 | 第47页 |
| 三.讨论 | 第47-49页 |
| 1.拟南芥耐盐突变体的筛选 | 第47-48页 |
| 2.拟南芥突变体胚胎发育的研究 | 第48-49页 |
| 四.下一步工作计划 | 第49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 英文缩略表 | 第55-56页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |