中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-8页 |
引言 | 第8-10页 |
文献综述 | 第10-21页 |
1. mRNA 差异显示方法的原理 | 第10页 |
2. mRNA 差异显示方法的优缺点及改进 | 第10-16页 |
·mRNA 差异显示方法的优缺点 | 第10-11页 |
·mRNA 差异显示方法的改进 | 第11-16页 |
·mRNA 差异显示降低假阳性的策略 | 第11-14页 |
·非放射性同位素银染差异显示方法的建立 | 第14-16页 |
3. mRNA 差异显示方法的应用 | 第16-18页 |
·mRNA 差异显示技术克隆 FSH/LH 应答基因 | 第16-17页 |
·mRNA 差异显示技术克隆排卵特异表达基因 | 第17页 |
·mRNA 差异显示技术在禽类卵泡发育中的应用 | 第17-18页 |
4. mRNA 差异显示方法同其他方法的比较 | 第18-20页 |
·mRNA 差异显示与消减杂交类技术 | 第18-19页 |
·mRNA差异显示与基因表达的系列分析技术 | 第19页 |
·mRNA差异显示和基因芯片 | 第19-20页 |
5. 结语 | 第20-21页 |
试验研究 | 第21-35页 |
1 材料与方法 | 第21-27页 |
·试验对象 | 第21-23页 |
·样品采集 | 第21页 |
·主要试剂 | 第21-22页 |
·主要仪器 | 第22页 |
·主要溶液的配制 | 第22-23页 |
·总RNA的提取及RNA完整性检测 | 第23页 |
·总 RNA 提取 | 第23页 |
·RNA 的 DNase 消化 | 第23页 |
·反转录 | 第23页 |
·PCR 扩增 | 第23-24页 |
·聚丙烯酰氨凝胶电泳及银染 | 第24页 |
·非变性1096聚丙烯酰氨凝胶的配制 | 第24页 |
·电泳 | 第24页 |
·银染 | 第24页 |
·差异片段的回收与再扩增 | 第24页 |
·差异片段的克隆 | 第24-26页 |
·DH5α感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
·连接 | 第25页 |
·转化 | 第25页 |
·质粒筛选 | 第25页 |
·插入片段鉴定 | 第25-26页 |
·差异片段的序列分析(Dot Blot 杂交) | 第26页 |
·Dot Blot 杂交 | 第26-27页 |
·探针标记 | 第26页 |
·预杂交 | 第26页 |
·杂交 | 第26页 |
·洗膜 | 第26页 |
·检测 | 第26-27页 |
2 结果与分析 | 第27-31页 |
·总RNA完整性检测 | 第27页 |
·银染差异显示条件的优化 | 第27-28页 |
·mRNA差异显示 | 第28-29页 |
·差异片段的再扩增与产物回收 | 第29页 |
·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第29-30页 |
·序列分析与比对 | 第30页 |
·Dot-blot 检测所扩片断的假阳性 | 第30-31页 |
3 讨论 | 第31-33页 |
4. 总结 | 第33-35页 |
参考文献 | 第35-43页 |
致谢 | 第43-44页 |
附录 | 第44-51页 |