中文摘要 | 第4-7页 |
abstract | 第7-10页 |
前言 | 第13-17页 |
材料与方法 | 第17-36页 |
一、材料 | 第17-20页 |
1、主要试剂与耗材 | 第17-18页 |
2、主要仪器 | 第18-19页 |
3、药物和试剂配制 | 第19-20页 |
4.实验细胞 | 第20页 |
二、方法 | 第20-36页 |
1、细胞培养 | 第20页 |
2、Western blotting检测蛋白表达 | 第20-23页 |
3、CRISPR/ Cas9质粒的构建与扩增提取 | 第23-27页 |
4、质粒转染细胞及稳转细胞系的建立 | 第27页 |
5、成像流式细胞仪检测自噬水平以及DNA双链断裂水平 | 第27页 |
6、冰冻切片制作及扫描共聚焦显微镜拍摄 | 第27-28页 |
7、电镜的制样与观察 | 第28页 |
8、胞质及核蛋白的分离提取 | 第28-29页 |
9、彗星电泳 | 第29页 |
10、免疫共沉淀 | 第29-30页 |
11、流式细胞仪检测细胞周期 | 第30页 |
12、荧光定量PCR | 第30-32页 |
13、siRNA干扰 | 第32页 |
14、构建突变质粒 | 第32-35页 |
15、统计学分析 | 第35-36页 |
实验结果 | 第36-61页 |
一、Beclin 1 在小鼠发育过程中存在动态的核转位现象 | 第36-38页 |
二、构建beclin1基因敲除细胞系 | 第38-40页 |
三、beclin1敲除使细胞DNA双链断裂损伤增加 | 第40-47页 |
四、1-50 及 254-278 位氨基酸是介导Beclin 1 蛋白入核的入核序列 | 第47-49页 |
五、Beclin 1 在 DNA 损伤修复中的作用不依赖于其在自噬途径中的功能 | 第49-56页 |
六、Beclin 1 在细胞核中与DNA拓扑异构酶IIβ 存在结合作用 | 第56-58页 |
七、Beclin 1 参与DNA损伤修复作用依赖于DNA拓扑异构酶IIβ | 第58-61页 |
讨论 | 第61-64页 |
综述 | 第64-70页 |
参考文献 | 第70-84页 |
博士学位期间公开发表的论文 | 第84-86页 |
附录 | 第86-87页 |
中英文缩略词汇表 | 第87-88页 |
致谢 | 第88-90页 |