| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-44页 |
| ·药物的eADME/T 研究 | 第12-14页 |
| ·药物代谢性质研究 | 第14-18页 |
| ·定性研究 | 第14-15页 |
| ·定量研究 | 第15-18页 |
| ·预测体内代谢清除率 | 第15-16页 |
| ·预测药物引起药物相互作用的能力 | 第16-18页 |
| ·药物代谢中的细胞色素P450 酶系 | 第18-22页 |
| ·细胞色素P450 酶 | 第18-20页 |
| ·细胞色素P450 酶系体外药物代谢的研究体系 | 第20-22页 |
| ·体外重组表达体系 | 第21页 |
| ·脂质体体系 | 第21页 |
| ·人肝微粒体 | 第21页 |
| ·原代培养的人肝细胞 | 第21-22页 |
| ·精密肝切片 | 第22页 |
| ·细胞色素P450 酶系动力学研究 | 第22-25页 |
| ·细胞色素P450 酶典型动力学 | 第22-23页 |
| ·细胞色素P450 酶非典型动力学 | 第23-25页 |
| ·细胞色素P450 酶催化循环及其组分相互作用 | 第25-34页 |
| ·P450 酶 | 第27-28页 |
| ·细胞色素P450 氧化还原酶 | 第28-31页 |
| ·细胞色素B_5 | 第31-33页 |
| ·磷脂膜 | 第33-34页 |
| ·底物及其他 | 第34页 |
| ·本课题研究思路 | 第34-36页 |
| 参考文献 | 第36-44页 |
| 第二章 细胞色素P450 酶基因及其相关基因克隆筛选 | 第44-61页 |
| ·引言 | 第44-45页 |
| ·材料与仪器 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-49页 |
| ·实验结果 | 第49-58页 |
| ·PCR 扩增产物图谱 | 第50-55页 |
| ·基因转化后重组质粒酶切图谱 | 第55-58页 |
| ·基因测序结果 | 第58页 |
| ·细胞色素P450 氧化还原酶基因克隆 | 第58-59页 |
| ·材料和方法 | 第59页 |
| ·结果与讨论 | 第59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-61页 |
| 第三章 细胞色素P450 酶酿酒酵母共表达体系的构建 | 第61-96页 |
| ·引言 | 第61-67页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第62页 |
| ·酵母表达系统 | 第62-64页 |
| ·昆虫细胞表达系统 | 第64页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第64-65页 |
| ·酿酒酵母表达系统的确定及构建策略 | 第65-67页 |
| ·材料与仪器 | 第67-73页 |
| ·实验方法及结果 | 第73-93页 |
| ·鉴定酵母出发菌株 | 第73页 |
| ·构建表达载体 | 第73-84页 |
| ·构建路线 | 第73-75页 |
| ·CPR 表达载体构建 | 第75-81页 |
| ·CYP3A4 表达载体构建 | 第81-84页 |
| ·CYP3A4 和CPR 的表达及活性鉴定 | 第84-91页 |
| ·酵母菌株表达条件的确立 | 第84-86页 |
| ·蛋白鉴定及活性分析 | 第86-91页 |
| ·表达菌株稳定性分析 | 第91-93页 |
| ·小结 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-96页 |
| 第四章 细胞色素P450-3A4 在酵母体系中的活性及抑制动力学研究 | 第96-114页 |
| ·引言 | 第96-97页 |
| ·材料与仪器 | 第97-99页 |
| ·实验方法 | 第99-112页 |
| ·CYP3A4 基因定点突变 | 第99-101页 |
| ·突变菌株和野生型菌株的构建 | 第101-102页 |
| ·获得目的基因 | 第101-102页 |
| ·目的基因的转化 | 第102页 |
| ·突变菌株和野生菌株的表达 | 第102页 |
| ·突变蛋白和野生型蛋白的活性分析 | 第102-104页 |
| ·硝本地平标准曲线 | 第102-103页 |
| ·睾酮6β-羟基化反应和氧化硝本地平酶动力学研究 | 第103-104页 |
| ·酮康唑抑制动力学分析 | 第104页 |
| ·CPR 与突变CYP3A4 的动力学关系及抑制动力学 | 第104页 |
| ·结果与讨论 | 第104-112页 |
| ·小结 | 第112页 |
| 参考文献 | 第112-114页 |
| 第五章 细胞色素P450 氧化还原酶在大肠杆菌重组系统、酿酒酵母重组系统和人肝微粒体三系统中的酶动力学比较 | 第114-149页 |
| ·引言 | 第114-115页 |
| ·材料与仪器 | 第115-118页 |
| ·实验方法 | 第118-129页 |
| ·样品制备 | 第118-122页 |
| ·细胞色素P450 氧化还原酶在大肠杆菌中的表达 | 第118-122页 |
| ·酵母微粒体和人肝微粒体制备 | 第122页 |
| ·动力学检测 | 第122-125页 |
| ·CPR 的动力学研究 | 第122-123页 |
| ·CPR 的双底物动力学研究 | 第123-124页 |
| ·CYP3A4 动力学研究 | 第124-125页 |
| ·磷脂分析 | 第125-129页 |
| ·总磷分析 | 第127页 |
| ·磷脂组成分析 | 第127-129页 |
| ·结果 | 第129-143页 |
| ·CPR 蛋白表达与纯化 | 第129-131页 |
| ·MTT 方法 | 第131页 |
| ·CPR 动力学 | 第131-136页 |
| ·CYP3A4 动力学 | 第136-138页 |
| ·总磷标线和定量分析 | 第138页 |
| ·磷脂定性及半定量分析 | 第138-143页 |
| ·讨论 | 第143-145页 |
| ·小结 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-149页 |
| 第六章 细胞色素P450 氧化还原酶和内质网膜对细胞色素P450 酶动力学的影响 | 第149-169页 |
| ·细胞色素P450 氧化还原酶对细胞色素P450 动力学的影响 | 第149-160页 |
| ·引言 | 第149页 |
| ·材料与仪器 | 第149-151页 |
| ·实验方法 | 第151-153页 |
| ·抗体制备及western 检测 | 第151-152页 |
| ·抗体制备 | 第151-152页 |
| ·western 检测 | 第152页 |
| ·CPR 活性检测及抑制 | 第152-153页 |
| ·CYP2A6 活性检测 | 第153页 |
| ·结果 | 第153-158页 |
| ·抗体制备及评价 | 第153-155页 |
| ·western 结果 | 第155页 |
| ·CPR 活性抑制 | 第155-156页 |
| ·CYP2A6 活性 | 第156-158页 |
| ·讨论 | 第158-160页 |
| ·内质网膜对细胞色素P450 酶动力学的影响 | 第160-167页 |
| ·引言 | 第160-161页 |
| ·材料和方法 | 第161-162页 |
| ·实验方法 | 第162-163页 |
| ·酵母微粒体制备及总磷检测 | 第162页 |
| ·麦角甾醇含量检测 | 第162-163页 |
| ·CPR 动力学和CYP3A4 动力学检测 | 第163页 |
| ·结果 | 第163-166页 |
| ·蛋白含量及P450 含量 | 第163页 |
| ·总磷和麦角甾醇含量 | 第163页 |
| ·CPR 动力学和CYP3A4 动力学 | 第163-165页 |
| ·麦角甾醇含量和CPR 及CYP3A4 别构动力学相关性分析 | 第165-166页 |
| ·讨论 | 第166-167页 |
| ·小结 | 第167页 |
| 参考文献 | 第167-169页 |
| 第七章 细胞色素P450 氧化还原酶动力学和肝脏疾病 | 第169-174页 |
| ·引言 | 第169-170页 |
| ·材料与仪器 | 第170页 |
| ·实验方法 | 第170-171页 |
| ·制备肝微粒体 | 第170页 |
| ·CPR 活性检测 | 第170-171页 |
| ·结果 | 第171-172页 |
| ·小结 | 第172-173页 |
| 参考文献 | 第173-174页 |
| 第八章 结论与展望 | 第174-179页 |
| ·结论 | 第174-175页 |
| ·创新点 | 第175-176页 |
| ·后续工作建议 | 第176-179页 |
| 作者简介 | 第179页 |
| 攻读博士学位期间发表文章目录 | 第179-182页 |
| 致谢 | 第182页 |
