| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-33页 |
| 1.荞麦 | 第11-20页 |
| ·荞麦的营养价值及生物活性 | 第11-12页 |
| ·荞麦的应用价值与开发前景 | 第12-14页 |
| ·荞麦的转基因研究进展 | 第14-20页 |
| ·荞麦的组织培养 | 第14页 |
| ·遗传转化方法及在荞麦中的应用 | 第14-16页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第14-15页 |
| ·原生质体介导的遗传转化 | 第15页 |
| ·基因枪(microprojectile bombardment)介导的遗传转化 | 第15-16页 |
| ·硅碳纤维介导的转化 | 第16页 |
| ·报告基因和选择标记基因 | 第16-19页 |
| ·常用的几种报告基因 | 第16-18页 |
| ·选择标记基因 | 第18-19页 |
| ·荞麦转化中存在的问题与展望 | 第19-20页 |
| 2 Na~+/H~+逆向转运蛋白与植物的抗盐性 | 第20-32页 |
| ·盐胁迫对植物的影响 | 第20-21页 |
| ·植物对盐胁迫的反应 | 第21-23页 |
| ·盐胁迫对植物形态发育的影响 | 第21-22页 |
| ·盐胁迫对植物生理生化代谢的影响 | 第22-23页 |
| ·植物的耐盐机制 | 第23-24页 |
| ·拒盐机制 | 第23页 |
| ·离子在细胞水平上的区隔化 | 第23-24页 |
| ·渗透调节 | 第24页 |
| ·植物抗盐的分子生物学研究进展 | 第24-30页 |
| ·渗透调节基因 | 第25页 |
| ·LEA基因 | 第25页 |
| ·ABA应答基因 | 第25-26页 |
| ·跨膜运输蛋白及其基因 | 第26页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第26-30页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的分离 | 第27-28页 |
| ·Na~+/H~+逆向转运蛋白与植物抗盐 | 第28页 |
| ·质膜Na~+/H~+逆向转运蛋介导Na~+的细胞外排 | 第28-29页 |
| ·液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白参与盐分区域化 | 第29-30页 |
| ·盐胁迫与信号传导 | 第30页 |
| ·提高植物抗盐性的几种途径 | 第30-32页 |
| ·渗透调节物质的合成 | 第30-31页 |
| ·抗氧化保护 | 第31页 |
| ·离子均衡 | 第31-32页 |
| 3.本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 荞麦组织培养及高频植株再生体系的建立 | 第33-41页 |
| 1 材料和方法 | 第33-34页 |
| ·供试品种 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·愈伤组织诱导 | 第33-34页 |
| ·芽的分化与增殖 | 第34页 |
| ·根的诱导 | 第34页 |
| ·计算方法 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-40页 |
| ·无菌苗生长时间对愈伤组织诱导的影响 | 第34-35页 |
| ·愈伤组织的诱导与继代培养 | 第35-36页 |
| ·愈伤组织分化和苗的形成 | 第36-38页 |
| ·培养基种类及激素配比对荞麦再生根的影响 | 第38-39页 |
| ·吲哚丁酸(IBA)和萘乙酸(NAA)对诱导荞麦再生苗生根的影响 | 第39-40页 |
| ·练苗与移栽 | 第40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 AtNHX1基因对荞麦的遗传转化及抗盐再生植株的获得 | 第41-69页 |
| 1 材料和方法 | 第41-55页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·菌株、质粒 | 第41-45页 |
| ·细菌培养基 | 第42页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第42-43页 |
| ·大肠杆菌的转化(热激法) | 第43页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·酶切分析 | 第44页 |
| ·农杆菌的转化 | 第44-45页 |
| ·转化与植株再生 | 第45页 |
| ·AS对荞麦转化的影响 | 第45-46页 |
| ·PCR分析 | 第46-47页 |
| ·荞麦基因组DNA的提取 | 第46页 |
| ·再生植株的PCR分析 | 第46-47页 |
| ·Southern印迹分析 | 第47-51页 |
| ·探针的制备 | 第47-48页 |
| ·再生植株的Southern杂交检测 | 第48-51页 |
| ·电泳 | 第48-49页 |
| ·凝胶变性 | 第49页 |
| ·毛细管法将DNA转到尼龙膜上 | 第49-50页 |
| ·预杂交 | 第50页 |
| ·杂交 | 第50页 |
| ·洗膜(在杂交管中进行) | 第50页 |
| ·免疫学检测 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR及Northern印迹分析 | 第51-53页 |
| ·再生植株的RNA提取 | 第51-52页 |
| ·RT-PCR | 第52-53页 |
| ·Northern印迹分析 | 第53页 |
| ·再生植株中Na~+、K~+及脯氨酸含量的测定 | 第53-54页 |
| ·再生植株中Na~+、K~+含量的测定 | 第53-54页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第54页 |
| ·次生代谢物质芦丁(rutin)含量的变化 | 第54-55页 |
| ·仪器、材料与试剂 | 第54-55页 |
| ·色谱条件 | 第55页 |
| ·芦丁标准曲线的绘制 | 第55页 |
| ·样品的处理 | 第55页 |
| 2.结果与分析 | 第55-67页 |
| ·质粒酶切和PCR检测 | 第55-56页 |
| ·预培养时间、外植体类型对转化频率的影响 | 第56-57页 |
| ·农杆菌侵染及共培养时间对荞麦转化的影响 | 第57-59页 |
| ·AS对荞麦转化的影响 | 第59页 |
| ·PCR分析和Southern印迹分析 | 第59-60页 |
| ·RT-PCR及Northern印迹分析 | 第60-61页 |
| ·Na~+、K~+及脯氨酸含量的分析 | 第61-64页 |
| ·Na~+含量的分析 | 第61-62页 |
| ·K~+含量及K~+/Na~+比率的分析 | 第62-63页 |
| ·脯氨酸含量的分析 | 第63-64页 |
| ·芦丁含量的分析 | 第64-67页 |
| ·检测波长的选择 | 第64-65页 |
| ·芦丁标准曲线的绘制 | 第65-66页 |
| ·样品中芦丁含量测定 | 第66-67页 |
| 3.讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 本研究的创新点 | 第70页 |
| 研究有待进一步解决的问题 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附件 | 第79-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文: | 第84页 |
| 攻读硕士学位期间获奖情况: | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
