中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-8页 |
前言 | 第8-11页 |
材料与方法 | 第11-28页 |
一、材料 | 第11-15页 |
1. 菌株和质粒 | 第11页 |
2. 细胞系 | 第11页 |
3. 实验动物 | 第11-12页 |
4. 限制性内切酶及其它修饰酶类 | 第12页 |
5. 抗体 | 第12页 |
6. 其它主要试剂及试剂盒 | 第12-13页 |
7. 主要仪器 | 第13页 |
8. 常用试剂的配置方法 | 第13-15页 |
二、方法 | 第15-28页 |
1. 细胞培养 | 第15-16页 |
2. 真核细胞的转染 | 第16页 |
3. 病毒包装与转导 | 第16-17页 |
4. 抗性单克隆细胞系的建立 | 第17-18页 |
5. 半定量 RT-PCR检测基因的mRNA表达水平 | 第18-20页 |
6. 质粒的构建 | 第20-22页 |
7. 转基因动物的鉴定 | 第22-23页 |
8. 组织RNA提取 | 第23页 |
9. 动物免疫应答实验 | 第23-24页 |
10 ELISA | 第24-25页 |
11. 转基因小鼠的荷瘤实验 | 第25-26页 |
12. 流式细胞术 | 第26-27页 |
13. NK细胞的分选及杀伤活性的检测 | 第27-28页 |
实验结果 | 第28-46页 |
第一部分 转Man2cl基因对移植性肿瘤生长和体液性免疫应答的影响 | 第28-41页 |
1. 转基因小鼠的确认 | 第28-32页 |
2. Man2cl基因在转基因小鼠的表达 | 第32-33页 |
3. Man2cl转基因小鼠的表型变化 | 第33页 |
4. 移植性肿瘤在Man2cl转基因小鼠的生长加速 | 第33-39页 |
5. 小鼠脾脏细胞中CD49b~+细胞(NK细胞)的比率 | 第39页 |
6. 小鼠对BSA的抗体应答 | 第39-41页 |
第二部分 Man2cl基因表达抑制对小鼠成纤维细胞NIH-3T3生长的影响 | 第41-46页 |
1. 细胞株的筛选 | 第41页 |
2. 靶序列的筛选 | 第41-42页 |
3. pXSNmU6-iMan2cl RNA载体构建 | 第42-43页 |
4. 病毒的包装和目的细胞的转染 | 第43-44页 |
5. Man2cl基因表达抑制效果的分析 | 第44页 |
6. Man2cl基因表达抑制细胞的克隆 | 第44-45页 |
7. Man2cl基因表达抑制对NIH-3T3细胞的生长无影响 | 第45-46页 |
讨论 | 第46-48页 |
参考文献 | 第48-51页 |
综述 | 第51-70页 |
RNA干扰 | 第51-70页 |
致谢 | 第70-71页 |
个人简历 | 第71页 |