| 独创性声明 | 第1页 |
| 关于论文使用授权的说明 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 植物病毒病及其防治 | 第11-12页 |
| 2 转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)的发现 | 第12-14页 |
| 3 PTGS的机制 | 第14-18页 |
| ·RNA阈值模型(RNA threshold model) | 第14页 |
| ·异常RNA模型(aberrant RNA model) | 第14-15页 |
| ·双链RNA模型 | 第15-18页 |
| ·dsRNA对RNA沉默机制的启动 | 第16-17页 |
| ·dsRNA降解成21-23nt RNA | 第17页 |
| ·21-23nt RNA是RNA沉默的特异性决定因子 | 第17-18页 |
| 4 PTGS是植物自然的抗病毒机制 | 第18-20页 |
| ·RNA病毒介导RMD(RNA Mediated Defendse,RMD) | 第18-19页 |
| ·DNA病毒介导RMD(RNA Mediated Defense,RMD) | 第19页 |
| ·基因沉默信号介导RMD(RNA Mediated Defense,RMD) | 第19-20页 |
| 5 利用转录后基因沉默(PTGS)防治植物病毒病研究进展 | 第20-22页 |
| 6 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 黄瓜花叶病毒(CMV)RNA2片段和MP基因反向重复原核表达载体的构建 | 第23-47页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·菌种、质粒 | 第23-24页 |
| ·酶、化学试剂 | 第24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·抗生素 | 第24页 |
| ·常用试剂的配制 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-34页 |
| ·DNA分子操作常规技术 | 第24-31页 |
| ·RT-PCR反应 | 第24-25页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·一般PCR反应 | 第25页 |
| ·DNA的纯化回收 | 第25-26页 |
| ·PCR产物试剂盒纯化回收 | 第25-26页 |
| ·DNA的割胶回收 | 第26页 |
| ·DNA的酶切体系 | 第26-27页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第27页 |
| ·DNA的连接 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的连接 | 第27页 |
| ·酶切片段与载体的连接 | 第27-28页 |
| ·感受态细胞制备方法 | 第28页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第28页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第28-31页 |
| ·重组质粒的PCR筛选 | 第28页 |
| ·煮沸法少量提取质粒 | 第28-29页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第29页 |
| ·CTAB法提取质粒 | 第29-30页 |
| ·试剂盒提取质粒 | 第30页 |
| ·质粒的纯化与浓缩 | 第30页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第31页 |
| ·电泳 | 第31页 |
| ·反向重复原核表达载体构建 | 第31-34页 |
| ·RNA2片段的反向重复原核表达载体构建策略 | 第31-34页 |
| ·MP基因的反向重复原核表达载体构建策略 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-45页 |
| ·RNA2片段的克隆与反向重复原核表达载体的构建 | 第34-41页 |
| ·RNA2片段的克隆 | 第34-36页 |
| ·CP基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·RNA2片段反向重复原核表达载体的构建 | 第38-41页 |
| ·MP基因的克隆与反向重复原核表达载体的构建 | 第41-45页 |
| ·MP基因的克隆 | 第41-43页 |
| ·MP基因反向重复原核表达载体的构建 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| ·中间序列的使用和选择 | 第45页 |
| ·反向重复原核表达载体构建策略 | 第45-46页 |
| ·构建策略的前景和意义 | 第46-47页 |
| 第三章 dsRNA的诱导表达和烟草攻毒试验 | 第47-56页 |
| 1 材料和方法 | 第47-50页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·酶及试剂 | 第47页 |
| ·dsRNA的离体转录 | 第47页 |
| ·dsRNA的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·dsRNA的粗提取方法 | 第48-49页 |
| ·高盐加热法 | 第48页 |
| ·CTAB法 | 第48页 |
| ·TRIZOL法 | 第48-49页 |
| ·溶菌酶法 | 第49页 |
| ·烟草攻毒试验 | 第49-50页 |
| ·设计处理 | 第49页 |
| ·接种方法 | 第49页 |
| ·检测方法 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-54页 |
| ·dsRNA的离体转录 | 第50-51页 |
| ·dsRNA的诱导表达和粗提取 | 第51页 |
| ·烟草攻毒试验 | 第51-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| ·dsRNA的稳定性 | 第54页 |
| ·dsRNA表达的影响因子 | 第54页 |
| ·dsRNA介导的抗性前景 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录A 本论文所用重要缩写词及中文对照 | 第63-64页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第64-68页 |
| 附录C 常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第68-70页 |
| 附录D 测序结果 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 个人简历 | 第78页 |
