| 引言 | 第1-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-36页 |
| ·蛋白质折叠复性研究的意义 | 第15-19页 |
| ·蛋白质折叠状态与疾病 | 第15-16页 |
| ·蛋白质折叠复性与蛋白质药物的设计和生产 | 第16-17页 |
| ·生物工程走向产业化的需要 | 第17-19页 |
| ·蛋白质折叠复性机理 | 第19-20页 |
| ·蛋白质折叠复性的概念及其特点 | 第19页 |
| ·变性蛋白质与天然蛋白质的结构特点 | 第19页 |
| ·蛋白质折叠的复杂动力学 | 第19-20页 |
| ·蛋白质体外折叠复性的主要影响因素 | 第20-22页 |
| ·蛋白质的复性浓度 | 第20页 |
| ·温度 | 第20-21页 |
| ·pH值 | 第21页 |
| ·离子强度 | 第21页 |
| ·巯基氧化和二硫键形成 | 第21-22页 |
| ·复性体系中变性剂的终浓度 | 第22页 |
| ·变性蛋白质浓度 | 第22页 |
| ·蛋白质体外折叠复性的方法 | 第22-27页 |
| ·稀释 | 第22-23页 |
| ·透析 | 第23-24页 |
| ·超滤 | 第24页 |
| ·反相胶团辅助复性 | 第24页 |
| ·双水相系统复性 | 第24页 |
| ·折叠促进剂和渗透质辅助复性 | 第24-25页 |
| ·聚集抑制剂辅助复性 | 第25页 |
| ·分子伴侣等蛋白质因子辅助复性 | 第25-26页 |
| ·人工分子伴侣辅助复性 | 第26页 |
| ·蛋白质工程促进复性 | 第26-27页 |
| ·层析复性 | 第27-31页 |
| ·非吸附层析:凝胶过滤层析复性 | 第27-28页 |
| ·吸附层析之一:疏水层析复性 | 第28-29页 |
| ·其他吸附层析复性 | 第29-30页 |
| ·催化层析 | 第30-31页 |
| ·蛋白质折叠复性的检测手段 | 第31-34页 |
| ·生物学功能检测 | 第32页 |
| ·光谱技术 | 第32-33页 |
| ·层析技术 | 第33-34页 |
| ·电泳技术 | 第34页 |
| ·可溶性蛋白的测定 | 第34页 |
| ·文献小结以及本文的立题思想与立题依据 | 第34-36页 |
| 2 复合干扰素的稀释复性研究 | 第36-57页 |
| ·前言 | 第36-37页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-42页 |
| ·发酵生产C-IFN工程菌 | 第37页 |
| ·C-IFN包涵体提取及变性蛋白制备 | 第37-38页 |
| ·稀释复性方法 | 第38页 |
| ·正交实验的设计 | 第38页 |
| ·渗透质对复合干扰素稀释复性的影响 | 第38-39页 |
| ·疏水色谱介质对复合干扰素稀释复性的影响 | 第39页 |
| ·疏水色谱介质-渗透质混合体系对复合干扰素稀释复性的影响 | 第39页 |
| ·C-IFN稀释复性不溶聚集体的再复性 | 第39页 |
| ·复合干扰素的活性测定原理、VSV病毒扩增以及VSV病毒效价滴定 | 第39-41页 |
| ·复合干扰素的活性测定步骤 | 第41-42页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第42页 |
| ·实验结果及讨论 | 第42-56页 |
| ·C-IFN工程菌的生产 | 第42-43页 |
| ·C-IFN包涵体的制备 | 第43-44页 |
| ·各因素对稀释复性的影响 | 第44-46页 |
| ·蛋白质还原变性与非还原变性对稀释复性比活和复性蛋白回收率的影响 | 第46-47页 |
| ·脉冲式稀释复性方法对复性效果的影响 | 第47-48页 |
| ·稀释复性率与复性时间的关系 | 第48-49页 |
| ·甘油和聚乙二醇分别对复合干扰素稀释复性的影响 | 第49-50页 |
| ·蛋白质浓度对聚乙二醇辅助复合干扰素稀释复性的影响 | 第50-51页 |
| ·不同疏水色谱介质对复合干扰素稀释复性的影响 | 第51-52页 |
| ·聚乙二醇浓度在色谱介质-聚乙二醇混合体系辅助复性复合干扰素中的作用 | 第52-54页 |
| ·不同稀释复性体系的比较 | 第54页 |
| ·变性剂盐酸胍对不溶聚集体再复性的影响 | 第54-55页 |
| ·聚集体复性与包涵体复性的比较 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 3 稀释复性C-IFN各构象体判定及C-IFN的结构分析 | 第57-71页 |
| ·前言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·反相高效液相层析分析 | 第57页 |
| ·凝胶过滤层析分析 | 第57页 |
| ·还原型与氧化型SDS-PAGE | 第57页 |
| ·离子交换层析分离纯化 | 第57-58页 |
| ·扩大工艺后的离子交换层析分析 | 第58页 |
| ·质谱分子量测定以及质谱二硫键定位测定 | 第58页 |
| ·N-末端氨基酸序列测定 | 第58页 |
| ·圆二色分析 | 第58页 |
| ·荧光光谱分析 | 第58页 |
| ·C-IFN生物活性测定 | 第58-59页 |
| ·实验结果与讨论 | 第59-70页 |
| ·稀释复性C-IFN的反相层析分析 | 第59页 |
| ·稀释复性C-IFN的可溶聚集体分析 | 第59-61页 |
| ·C-IFN二硫键测定以及稀释复性C-IFN错配体判定 | 第61-62页 |
| ·复性C-IFN在反相层析中活性峰的判定 | 第62-65页 |
| ·活性C-IFN的一级结构分析 | 第65-67页 |
| ·活性C-IFN的圆二色波谱扫描和荧光光谱比较 | 第67-69页 |
| ·C-IFN在离子交换层析分离纯化中的再变性 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 4 复合干扰素的疏水相互作用色谱复性研究 | 第71-94页 |
| ·前言 | 第71页 |
| ·穿过式疏水相互作用色谱复性C-IFN研究 | 第71-75页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72页 |
| ·实验结果与讨论 | 第72-75页 |
| ·吸附式疏水相互作用色谱复性C-IFN研究 | 第75-80页 |
| ·实验材料 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-76页 |
| ·实验结果与讨论 | 第76-80页 |
| ·梯度洗脱结合吸附式疏水相互作用色谱复性C-IFN研究 | 第80-93页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·实验方法 | 第80-82页 |
| ·实验结果与讨论 | 第82-93页 |
| ·本章小结 | 第93-94页 |
| 5 粒细胞集落刺激因子的疏水层析复性研究 | 第94-110页 |
| ·前言 | 第94页 |
| ·实验材料 | 第94-95页 |
| ·实验方法 | 第95-98页 |
| ·G-CSF包涵体变性蛋白的获得及其稀释复性 | 第95页 |
| ·无梯度疏水作用层析复性 | 第95页 |
| ·渗透质辅助无梯度疏水作用层析复性 | 第95-96页 |
| ·盐酸胍单梯度疏水作用层析复性 | 第96页 |
| ·渗透质辅助盐酸胍单梯度疏水作用层析复性 | 第96页 |
| ·渗透质和盐酸胍双梯度疏水作用层析复性 | 第96页 |
| ·G-CSF的反相高效液相层析分析 | 第96-97页 |
| ·G-CSF的荧光光谱分析 | 第97页 |
| ·G-CSF的生物活性测定 | 第97-98页 |
| ·实验结果与讨论 | 第98-108页 |
| ·稀释复性G-CSF | 第98页 |
| ·渗透质辅助稀释复性G-CSF | 第98-100页 |
| ·不同疏水介质对G-CSF复性的影响 | 第100-101页 |
| ·渗透质辅助式洗脱对无梯度疏水层析复性G-CSF的影响 | 第101页 |
| ·渗透质辅助式洗脱对盐酸胍梯度疏水层析复性G-CSF的影响 | 第101-102页 |
| ·聚乙二醇与盐酸胍双梯度疏水层析复性 G-CSF | 第102-103页 |
| ·甘油与盐酸胍双梯度疏水作用层析复性 G-CSF | 第103-104页 |
| ·甘油浓度和甘油浓度梯度斜率对G-CSF复性效果的影响 | 第104-105页 |
| ·梯度长度对G-CSF复性效果的影响 | 第105-106页 |
| ·不同疏水层析方法复性G-CSF的荧光光谱分析 | 第106-107页 |
| ·几种不同方法复性G-CSF的比较 | 第107-108页 |
| ·本章小结 | 第108-110页 |
| 6 结论 | 第110-113页 |
| ·本文工作的主要结果 | 第110-111页 |
| ·本论文的主要创新之处 | 第111-112页 |
| ·今后的工作展望 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-122页 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 大连理工大学学位论文版权使用授权书 | 第124页 |
