| 第一章 文献综述 | 第1-34页 |
| 第一节 海水养殖鱼类主要弧菌病的研究现状 | 第12-21页 |
| 1 主要的致病性弧菌 | 第12-17页 |
| ·哈维氏弧菌(Vibrio harveyi) | 第12-14页 |
| ·鳗弧菌(Vibrio anguillarum) | 第14-15页 |
| ·灿烂弧菌(Vibrio splendidus) | 第15-16页 |
| ·创伤弧菌(Vibrio vulnificus) | 第16页 |
| ·副溶血弧菌(Vibrio Parahaemolyticus) | 第16-17页 |
| 2 几种弧菌的主要致病因子 | 第17-21页 |
| ·溶血素 | 第17-18页 |
| ·蛋白酶 | 第18-19页 |
| ·脂多糖 | 第19-20页 |
| ·外膜蛋白 | 第20页 |
| ·其他胞外产物 | 第20-21页 |
| 第二节 细菌磷脂酶的研究进展 | 第21-34页 |
| 1 磷脂酶的种类及分布 | 第21-23页 |
| ·磷脂酶A | 第22-23页 |
| ·磷脂酶C | 第23页 |
| ·磷脂酶D | 第23页 |
| 2 磷脂酶的性质 | 第23-26页 |
| ·磷脂酶A | 第23-24页 |
| ·磷脂酶C | 第24-25页 |
| ·磷脂酶D | 第25-26页 |
| 3 磷脂酶的分离纯化 | 第26-28页 |
| 4 磷脂酶在细菌致病过程中的作用 | 第28-32页 |
| 5 本论文的研究目的及意义 | 第32-34页 |
| 第二章 哈维氏弧菌磷脂酶 C 的分离纯化 | 第34-52页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第34-36页 |
| ·菌种来源 | 第34页 |
| ·仪器与试剂 | 第34-36页 |
| ·仪器 | 第34-35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-42页 |
| ·不同病原菌中磷脂酶活性的检测 | 第36页 |
| ·NPPC 法测定磷脂酶C 活力 | 第36-37页 |
| ·对硝基苯酚标准曲线的制作 | 第36-37页 |
| ·磷脂酶C 活力的测定 | 第37页 |
| ·哈维氏弧菌的培养及胞外产物的制备 | 第37页 |
| ·(NH_4)_2SO_4分级盐析 | 第37-38页 |
| ·磷脂酶C 粗酶的分离纯化 | 第38-39页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析 | 第38页 |
| ·Sephadex G-100 凝胶过滤层析 | 第38页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析 | 第38-39页 |
| ·磷脂酶C 纯度分析及分子量测定 | 第39-41页 |
| ·Bradford 法测定蛋白质浓度 | 第39-40页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量 | 第40页 |
| ·Sephadex G-200测定分子量 | 第40-41页 |
| ·N 末端氨基酸序列的测定 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第41页 |
| ·蛋白质转印过程 | 第41-42页 |
| ·N末端氨基酸序列测序 | 第42页 |
| ·薄层层析法分析哈维氏弧菌磷脂酶C | 第42页 |
| 3 实验结果 | 第42-50页 |
| ·不同病原菌中磷脂酶活性的检测 | 第42-43页 |
| ·(NH_4)_2SO_4分级盐析曲线的绘制 | 第43-44页 |
| ·哈维氏弧菌磷脂酶C 的纯化 | 第44-47页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析 | 第44页 |
| ·Sephadex G-100凝胶过滤层析 | 第44-45页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析 | 第45-46页 |
| ·哈维氏弧菌磷脂酶C 的纯化结果 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE测定磷脂酶C纯度及分子量 | 第47-48页 |
| ·Sephadex G-200 测定磷脂酶C 分子量 | 第48页 |
| ·薄层层析分析磷脂酶C 的活性 | 第48-49页 |
| ·N末端氨基酸序列的测定结果 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 哈维氏弧菌磷脂酶 C 的性质研究 | 第52-61页 |
| 1 实验仪器 | 第52页 |
| 2 实验方法 | 第52-54页 |
| ·磷脂酶C 最适反应温度的测定 | 第52页 |
| ·温度对磷脂酶C 稳定性的影响 | 第52页 |
| ·磷脂酶C最适pH值的测定 | 第52-53页 |
| ·pH 值对磷脂酶C 稳定性的影响 | 第53页 |
| ·磷脂酶C 氨基酸侧链的化学修饰 | 第53页 |
| ·金属离子和酶抑制剂对磷脂酶C 活性的影响 | 第53页 |
| ·磷脂酶C 的细胞毒性 | 第53-54页 |
| 3 实验结果 | 第54-59页 |
| ·温度对磷脂酶C 活性的影响 | 第54-55页 |
| ·pH 值对磷脂酶C 活性的影响 | 第55-56页 |
| ·化学修饰剂对酶反应活性的影响 | 第56-57页 |
| ·金属离子和酶抑制剂对酶活性的影响 | 第57-58页 |
| ·磷脂酶C 对牙鲆鳃细胞的毒性作用 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 哈维氏弧菌和创伤弧菌磷脂酶 C 相关基因的克隆 | 第61-72页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第61-62页 |
| ·实验菌株 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·仪器 | 第61-62页 |
| ·培养基 | 第62页 |
| 2 实验方法 | 第62-67页 |
| ·基因组DNA的制备 | 第62页 |
| ·目的基因的PCR 扩增 | 第62-63页 |
| ·PCR 产物的分子克隆 | 第63-67页 |
| ·目的片段的纯化与回收 | 第63页 |
| ·目的片段的体外连接 | 第63-64页 |
| ·转化 | 第64-66页 |
| ·PCR 法鉴定阳性克隆 | 第66-67页 |
| ·测序 | 第67页 |
| 3 结果 | 第67-71页 |
| ·蛋白基因的PCR 扩增 | 第67页 |
| ·目的片段的纯化和回收 | 第67-68页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第68-69页 |
| ·测序与数据处理 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 已发表和撰写的文章 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
