| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-26页 |
| ·植物发生寒害的本质及经寒冷驯化植物的生理生化变化 | 第10-11页 |
| ·植物低温胁迫应答的分子机制 | 第11-21页 |
| ·渗透调节 | 第12页 |
| ·LEA蛋白的保护作用 | 第12-13页 |
| ·转录因子 | 第13-21页 |
| ·转录因子概念、结构及活性调控 | 第14页 |
| ·AP2／EREBP转录因子家族的特征、分类和功能 | 第14-16页 |
| ·CRT／DRE顺式作用元件的鉴定 | 第16-17页 |
| ·拟南芥CBF／DREB1转录因子的克隆 | 第17-18页 |
| ·CBF／DREB1转基因的耐逆性 | 第18-19页 |
| ·CBF／DREB1上游相关基因的鉴定 | 第19-21页 |
| ·拟南芥sfr6冷冻敏感型突变体 | 第21页 |
| ·本研究的目的意义、技术路线 | 第21-26页 |
| ·研究的目的意义 | 第21页 |
| ·研究的技术路线 | 第21-26页 |
| ·CBF的克隆 | 第21-23页 |
| ·CBF的表达 | 第23页 |
| ·构建植物表达载体转化棉花 | 第23-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·PCR引物 | 第26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-39页 |
| ·棉花DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第29页 |
| ·质粒提取 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第30页 |
| ·DNA片段的回收 | 第30-31页 |
| ·棉花CBF基因PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·BamHI酶切反应 | 第32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·Southern杂交 | 第32-34页 |
| ·棉花叶片RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·Northern杂交 | 第35-36页 |
| ·棉花遗传转化及转基因植株的筛选 | 第36-39页 |
| ·大量提取pYX4和pYX4质粒 | 第36-37页 |
| ·花粉管通道法转化棉花中12、33B、99344 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第38-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-54页 |
| ·棉花CBF的克隆及序列分析 | 第39-43页 |
| ·棉花中CBF基因家族成员数量的研究 | 第43-48页 |
| ·Southern杂交 | 第43-47页 |
| ·高质量棉花DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·棉花基因组总DNA的酶切 | 第44-45页 |
| ·探针的制备 | 第45-46页 |
| ·Southern杂交 | 第46-47页 |
| ·棉花BAC库的筛选 | 第47-48页 |
| ·棉花中CBF基因经过寒冷驯化后表达情况的研究 | 第48-49页 |
| ·棉花RNA的提取 | 第48页 |
| ·棉花Northern杂交 | 第48-49页 |
| ·棉花遗传转化及转基因植株的筛选 | 第49-54页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第49-53页 |
| ·棉花的遗传转化和转基因的筛选 | 第53-54页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第54-57页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·棉花CBF基因的克隆及序列分析 | 第54页 |
| ·棉花中CBF基因家族成员数量的研究和BAC库的筛选 | 第54页 |
| ·棉花CBF基因经过寒冷诱导后表达情况的研究 | 第54页 |
| ·CBF基因的棉花遗传转化及转基因植株的筛选 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
