| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 前言 | 第13-15页 |
| 2 国内外克伦特罗中毒事件 | 第15页 |
| ·国外 | 第15页 |
| ·国内 | 第15页 |
| 3 克伦特罗的残留 | 第15-18页 |
| ·在机体内的吸收和分布 | 第15-17页 |
| ·各国制定的克伦特罗最高残留限量 | 第17-18页 |
| 4 检测方法 | 第18-22页 |
| ·样本取材对检测的影响 | 第18-19页 |
| ·常用检测方法 | 第19-22页 |
| ·气相色谱-质谱联用法(GC-MS) | 第20页 |
| ·高压液相色谱法(HPLC) | 第20页 |
| ·酶联免疫法(ELISA) | 第20-21页 |
| ·放射免疫分析技术(RIA) | 第21页 |
| ·荧光免疫分析法(FIA) | 第21页 |
| ·毛细管区带电泳法(CE) | 第21-22页 |
| 5 检测方法的新进展 | 第22-23页 |
| 6 结语 | 第23-24页 |
| 7 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 人工合成盐酸克伦特罗单克隆抗体制备 | 第25-54页 |
| 1 原理 | 第25页 |
| ·单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)技术 | 第25页 |
| 2 材料 | 第25-29页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·实验动物和细胞 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·溶液及其配制 | 第26-29页 |
| 3 方法 | 第29-39页 |
| ·人工合成半抗原 | 第29页 |
| ·盐酸克伦特罗抗原的制备与鉴定 | 第29-31页 |
| ·牛血清白蛋白-克伦特罗(BSA-CL)免疫抗原的合成 | 第29-30页 |
| ·卵清白蛋白-克伦特罗(OVA-CL)包被抗原的合成 | 第30页 |
| ·测定偶联后载体蛋白浓度 | 第30页 |
| ·半抗原与载体蛋白偶联物的鉴定 | 第30-31页 |
| ·盐酸克伦特罗单克隆细胞株的制备 | 第31-36页 |
| ·小鼠免疫 | 第32页 |
| ·检测方法的建立和小鼠血清效价及特异性的检测 | 第32-33页 |
| ·骨髓瘤细胞的准备及培养 | 第33-34页 |
| ·骨髓瘤细胞的选择 | 第33页 |
| ·骨髓瘤细胞的复苏 | 第33页 |
| ·骨髓瘤细胞培养 | 第33-34页 |
| ·骨髓瘤细胞悬液的制备 | 第34页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第34页 |
| ·免疫脾细胞悬液的制备 | 第34-35页 |
| ·细胞融合 | 第35页 |
| ·选择性培养 | 第35页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第35-36页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第36页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第36页 |
| ·单克隆抗体的制备与纯化 | 第36-39页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第37页 |
| ·腹水效价测定 | 第37页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第37页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第37-39页 |
| ·单克隆抗体免疫球蛋白类及亚类的鉴定 | 第37-38页 |
| ·纯化抗体的SDS-PAGE电泳 | 第38页 |
| ·抗体含量和效价的测定 | 第38-39页 |
| ·单克隆抗体特异性分析 | 第39页 |
| ·灵敏度及交叉反应率的确定 | 第39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-51页 |
| ·偶联物的制备与鉴定 | 第39-41页 |
| ·偶联物的制备 | 第39-41页 |
| ·测定偶联后的载体蛋白浓度 | 第41页 |
| ·免疫小鼠血清效价ELISA分析 | 第41-45页 |
| ·血清免疫效价的测定 | 第42-43页 |
| ·抗体筛选方法的建立 | 第43-45页 |
| ·间接ELISA法的最佳工作条件的确定 | 第43-44页 |
| ·筛选方法可行性的确定 | 第44-45页 |
| ·单克隆细胞的制备 | 第45-51页 |
| ·细胞融合与筛选 | 第45-46页 |
| ·单克隆抗体细胞株的初步鉴定 | 第46-51页 |
| ·腹水单克隆抗体制备 | 第46页 |
| ·单克隆抗体免疫球蛋白类别及亚类测定 | 第46-47页 |
| ·纯化的抗体蛋白SDS-PAGE电泳 | 第47-48页 |
| ·腹水蛋白含量测定和抗体效价测定 | 第48-49页 |
| ·盐酸克伦特罗单克隆抗体间接竞争ELISA标准曲线 | 第49页 |
| ·单克隆抗体的灵敏度及交叉反应率 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| ·抗原 | 第51页 |
| ·ELISA的筛选方法 | 第51-52页 |
| ·影响细胞融合的因素 | 第52-54页 |
| ·骨髓瘤细胞 | 第52页 |
| ·脾细胞选择 | 第52页 |
| ·融合剂 | 第52页 |
| ·融合操作 | 第52-53页 |
| ·杂交瘤细胞的检测和克隆 | 第53-54页 |
| 第三章 金标免疫层析速测克伦特罗试纸条的制备 | 第54-71页 |
| 1 金标免疫层析速测试纸条原理 | 第54-55页 |
| ·双抗夹心法 | 第54-55页 |
| ·竞争法 | 第55页 |
| 2 试剂和仪器 | 第55-57页 |
| ·试剂和溶液 | 第56页 |
| ·仪器 | 第56-57页 |
| 3 方法 | 第57-62页 |
| ·胶体金制备 | 第57-59页 |
| ·玻璃容器的清洁 | 第57页 |
| ·柠檬酸三钠还原法制备金溶胶 | 第57-59页 |
| ·胶体金抗体的制备 | 第59页 |
| ·标记抗体最适量的选择 | 第59页 |
| ·胶体金标记抗体 | 第59页 |
| ·抗体的固相化 | 第59-60页 |
| ·抗原包被硝酸纤维膜 | 第59-60页 |
| ·标记胶体金玻璃纤维的制备 | 第60页 |
| ·试纸条的制备 | 第60-61页 |
| ·样品的检测 | 第61-62页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条检测灵敏度 | 第61页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条线性实验 | 第61页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条的反应交叉性 | 第61-62页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条重复性与稳定性 | 第62页 |
| ·金标免疫层析法试纸条检测与间接竞争ELISA的对比测定 | 第62页 |
| 4 结果与分析 | 第62-68页 |
| ·金溶胶颗粒的粒径的选择 | 第62-64页 |
| ·胶体金标记的抗体工作浓度的选择 | 第64页 |
| ·胶体金标记抗体效果 | 第64-65页 |
| ·抗体固相化工作浓度选择 | 第65-66页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条检测灵敏度 | 第66-67页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条线性实验 | 第67页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条的反应交叉性 | 第67页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条重复性与稳定性 | 第67页 |
| ·金标免疫层析法试纸条检测与间接竞争ELISA的对比测定 | 第67-68页 |
| 5 讨论 | 第68-71页 |
| ·试纸条制备的细节要求 | 第68页 |
| ·影响试纸条检测速度和检测限的主要因素 | 第68-69页 |
| ·该方法用于检测克伦特罗与其他方法相比的优越性 | 第69页 |
| ·金标免疫层析速测试纸条检测克伦特罗存在的问题 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 英文缩略语索引 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
