| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRCT | 第8-19页 |
| 英文缩略词表 | 第19-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-40页 |
| ·乳腺癌骨转移的研究进展 | 第21-32页 |
| ·乳腺癌骨转移的途径和方式 | 第21-22页 |
| ·乳腺癌骨转移的分子和细胞学机制 | 第22-29页 |
| ·乳腺癌骨转移模型的研究 | 第29-31页 |
| ·治疗现状 | 第31-32页 |
| ·骨唾液酸蛋白的研究现状 | 第32-38页 |
| ·骨唾液酸蛋白的结构与理化性质 | 第32-35页 |
| ·骨唾液酸蛋白与肿瘤骨转移的研究进展 | 第35-38页 |
| ·本课题的研究背景及研究意义 | 第38页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第38-40页 |
| ·骨唾液蛋白基因的亚克隆及真核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·稳定表达BSP的乳腺癌细胞株的建立和鉴定 | 第39页 |
| ·稳定转染乳腺癌细胞生物学性质的研究 | 第39页 |
| ·BSP在乳腺癌骨转移中作用的体内研究 | 第39-40页 |
| 第二章 pIRES2-hBSP-EGFP和pID-hBSP-EGFP真核表达载体的构建及在人乳腺癌细胞MDA-MB-231BR和MDA-MB-231BO中的表达 | 第40-66页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-43页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·培养基和溶液 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·技术路线 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-51页 |
| ·重组质粒pIRES2-hBSP-EGFP和pDisplay-hBSP的构建 | 第43-48页 |
| ·pID-hBSP-EGFP载体的构建 | 第48-50页 |
| ·乳腺癌细胞的培养 | 第50页 |
| ·乳腺癌细胞的转染 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-65页 |
| ·pIRES2-hBSP-EGFP载体的构建 | 第51-55页 |
| ·pID-hBSP-EGFP载体的构建 | 第55-64页 |
| ·细胞转染结果 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第三章 乳腺癌细胞转染条件的优化及稳定转染乳腺癌细胞的筛选和鉴定 | 第66-92页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·试验材料 | 第66-70页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66-67页 |
| ·培养基和溶液 | 第67-69页 |
| ·主要仪器设备 | 第69-70页 |
| ·技术路线 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-76页 |
| ·乳腺癌细胞转染条件的优化 | 第70-71页 |
| ·稳定转染细胞的筛选 | 第71页 |
| ·hBSP表达的检测 | 第71-76页 |
| ·统计方法 | 第76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-90页 |
| ·乳腺癌细胞转染条件的优化 | 第76-79页 |
| ·稳定转染乳腺癌细胞的筛选 | 第79-81页 |
| ·免疫组化检测hBSP的表达 | 第81-83页 |
| ·基因组DNA neo基因扩增结果 | 第83-85页 |
| ·SDS-PAGE和Western-bloting检测hBSP表达情况 | 第85-87页 |
| ·ELISA检测细胞培养上清hBSP表达情况 | 第87-88页 |
| ·半定量RT-PCR检测细胞中hBSP mRNA表达情况 | 第88-90页 |
| ·小结 | 第90-92页 |
| 第四章 BSP的表达对乳腺癌细胞生物学性质的影响 | 第92-107页 |
| ·前言 | 第92页 |
| ·实验材料 | 第92-94页 |
| ·细胞和鸡胚 | 第92页 |
| ·主要试剂 | 第92-93页 |
| ·溶液 | 第93页 |
| ·主要仪器设备 | 第93-94页 |
| ·技术路线 | 第94页 |
| ·实验方法 | 第94-97页 |
| ·乳腺癌细胞生长曲线测定方法 | 第94页 |
| ·双层琼脂法测定乳腺癌细胞克隆形成率 | 第94-95页 |
| ·乳腺癌细胞粘附试验 | 第95页 |
| ·鸡胚尿囊绒膜试验测定乳腺癌细胞血管侵袭能力 | 第95-96页 |
| ·乳腺癌细胞骨条吸附试验 | 第96-97页 |
| ·统计方法 | 第97页 |
| ·结果与讨论 | 第97-105页 |
| ·BSP的表达对乳腺癌细胞生长特性的影响 | 第97-98页 |
| ·BSP的表达对乳腺癌细胞克隆形成活性的影响 | 第98-99页 |
| ·BSP的表达对乳腺癌细胞粘附特性的影响 | 第99-101页 |
| ·BSP的表达对乳腺癌细胞血管侵袭能力的影响 | 第101-104页 |
| ·BSP的表达对乳腺癌细胞骨条吸附能力的影响 | 第104-105页 |
| ·小结 | 第105-107页 |
| 第五章 BSP在乳腺癌骨转移中作用的体内初步研究 | 第107-123页 |
| ·前言 | 第107页 |
| ·实验材料 | 第107-109页 |
| ·细胞和动物 | 第107页 |
| ·主要试剂 | 第107-108页 |
| ·溶液 | 第108页 |
| ·主要仪器设备 | 第108-109页 |
| ·技术路线 | 第109页 |
| ·实验方法 | 第109-112页 |
| ·裸鼠的饲养 | 第109页 |
| ·乳腺癌细胞的裸鼠左心室注射 | 第109-110页 |
| ·X光片的拍摄 | 第110页 |
| ·组织学检查 | 第110-112页 |
| ·统计方法 | 第112页 |
| ·结果与讨论 | 第112-122页 |
| ·裸鼠的体重变化 | 第112-113页 |
| ·裸鼠骨组织x光片检查 | 第113-116页 |
| ·裸鼠中器官发生转移的几率 | 第116-117页 |
| ·脑组织HE染色结果 | 第117-118页 |
| ·肺组织HE染色结果 | 第118-119页 |
| ·骨组织HE染色结果 | 第119-121页 |
| ·骨组织免疫组化结果 | 第121-122页 |
| ·小结 | 第122-123页 |
| 结论与展望 | 第123-126页 |
| 参考文献 | 第126-136页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 附录 | 第139-142页 |
