| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 目次 | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-21页 |
| ·瓜氨酸研究概况 | 第9-17页 |
| ·瓜氨酸的理化性质 | 第9页 |
| ·瓜氨酸在生物代谢中的作用 | 第9-14页 |
| ·瓜氨酸在各领域中的应用 | 第14-15页 |
| ·瓜氨酸的制备 | 第15-17页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶研究概况 | 第17-19页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶的理化性质 | 第17页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶的研究近况 | 第17-18页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶的用途 | 第18页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶的制备 | 第18-19页 |
| ·本课题的研究思路与研究意义 | 第19-21页 |
| ·研究思路 | 第19-20页 |
| ·研究意义 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-35页 |
| ·材料 | 第21-25页 |
| ·生化试剂 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21-22页 |
| ·常用储存液及配法 | 第22-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-35页 |
| ·恶臭假单胞杆菌DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶基因的PCR扩增 | 第26页 |
| ·PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| ·PCR回收产物与T克隆载体连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌JM109和BL21感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·连接产物转化JM109感受态细胞 | 第27-28页 |
| ·质粒的提取 | 第28页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒与连接载体的双酶切 | 第29-30页 |
| ·重组质粒与连接载体双酶切产物的回收 | 第30页 |
| ·重组质粒与连接载体双酶切回收产物的连接 | 第30页 |
| ·连接产物转化BL21(DE3)和JM109感受态细胞 | 第30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·蛋白的表达 | 第31页 |
| ·细胞壁的破碎 | 第31-32页 |
| ·酶活力测定 | 第32页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白表达结果 | 第32-35页 |
| 3 结果和分析 | 第35-49页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶的PCR扩增与酶切重组 | 第35页 |
| ·酶切鉴定结果及分析 | 第35-37页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第37-41页 |
| ·BL21(DE3)(pET-30a-cit)的构建 | 第37-39页 |
| ·JM109(pBV220-cit)的构建 | 第39-41页 |
| ·酶活的测定 | 第41-43页 |
| ·标准曲线的确定 | 第41-42页 |
| ·酶活的测定结果 | 第42-43页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶SDS-PAGE检测结果 | 第43-44页 |
| ·序列测定与分析 | 第44-49页 |
| ·序列测定结果 | 第44页 |
| ·序列同源性比对 | 第44-47页 |
| ·精氨酸脱亚氨基酶二级结构分析 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-55页 |
| ·影响基因克隆的因素 | 第49-50页 |
| ·复性温度对PCR结果的影响 | 第49页 |
| ·提高连接效率的方法 | 第49页 |
| ·影响转化效率的因素 | 第49-50页 |
| ·表达载体与菌株的选择 | 第50页 |
| ·JM109(pBV220-cit)中精氨酸脱亚氨基酶未表达的原因 | 第50-51页 |
| ·BL21(DE3)(pET-30a-cit)产酶能力研究 | 第51页 |
| ·破壁方法的选择 | 第51页 |
| ·酶的诱导表达 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE结果分析 | 第51-52页 |
| ·细菌精氨酸脱亚氨基酶电泳样品中SDS含量对结果的影响 | 第51页 |
| ·BL21(DE3)(pET-30a-cit)未经诱导而产酶的原因 | 第51-52页 |
| ·关于测序结果的讨论 | 第52-53页 |
| ·研究前景 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
