SCMV-CP基因克隆及遗传转化甘蔗研究
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 一 前言 | 第10-33页 |
| 1 甘蔗花叶病及甘蔗花叶病毒 | 第10-13页 |
| ·甘蔗花叶病发生及其危害 | 第10页 |
| ·甘蔗花叶病毒 | 第10-12页 |
| ·甘蔗花病毒株系分类与分布 | 第10-11页 |
| ·甘蔗花叶病毒寄主 | 第11-12页 |
| ·马铃薯Y病毒属病毒的基因组结构与功能 | 第12-13页 |
| 2 植物抗病毒基因工程的策略 | 第13-23页 |
| ·病毒来源的基因介导的病毒抗性 | 第13-21页 |
| ·外壳蛋白介导的保护作用 | 第13-16页 |
| ·复制酶介导的保护作用 | 第16-18页 |
| ·运动蛋白介导的保护作用 | 第18-20页 |
| ·卫星RNA | 第20页 |
| ·缺陷干扰型RNA | 第20-21页 |
| ·反义链RNA和核酶 | 第21页 |
| ·非病毒来源的基因介导的病毒抗性 | 第21-23页 |
| ·病程相关蛋白基因 | 第21-22页 |
| ·植物抗病基因 | 第22页 |
| ·植物抗体基因 | 第22页 |
| ·核糖体失活蛋白 | 第22-23页 |
| ·干扰素 | 第23页 |
| 3 植物转基因沉默与RNA介导的病毒抗性 | 第23-30页 |
| ·植物转基因沉默 | 第23-27页 |
| ·转录水平上基因沉默(TGS) | 第23-25页 |
| ·转录后水平上基因沉默(PTGS) | 第25-27页 |
| ·RNA介导的病毒抗性 | 第27-30页 |
| ·RNA介导的病毒抗性机制 | 第27-28页 |
| ·RNA介导的抗性与蛋白质介导的抗性差异 | 第28-29页 |
| ·RNA介导的抗性的同源性的特点 | 第29-30页 |
| 4 甘蔗遗传转化研究进展 | 第30-32页 |
| ·抗除草剂基因的转导 | 第30页 |
| ·抗病虫害基因的转导 | 第30-31页 |
| ·其它基因转导基因的转导 | 第31-32页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第32-33页 |
| 二 材料和方法 | 第33-57页 |
| 1 实验材料 | 第33-37页 |
| ·供试的植物病毒 | 第33页 |
| ·转化受体材料 | 第33页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第33-34页 |
| ·常用化学试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·常用溶液的成分和配制 | 第34-37页 |
| ·常用培养基配制 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-57页 |
| ·SCMV-FJ CP基因克隆及序列分析 | 第37-43页 |
| ·感病甘蔗叶片总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR和目的片段回收 | 第38-40页 |
| ·目的片段的克隆 | 第40-43页 |
| ·基因测序和序列的比对、分析 | 第43页 |
| ·SCMV-CP基因遗传转化甘蔗 | 第43-49页 |
| ·受体材料再生体系的建立 | 第43-44页 |
| ·G418浓度梯度筛选预实验 | 第44页 |
| ·基因枪介导的甘蔗遗传转化 | 第44-49页 |
| ·质粒DNA的大量提取、纯化及鉴定 | 第44-47页 |
| ·基因枪轰击转化甘蔗 | 第47-48页 |
| ·转化愈伤组织的筛选和抗性植株再生 | 第48-49页 |
| ·抗性植株的分子鉴定 | 第49-54页 |
| ·抗性植株基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·抗性植株基因组DNA的PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·DNA点杂交 | 第51页 |
| ·Southern杂交 | 第51-53页 |
| ·转化植株RT-PCR检测 | 第53-54页 |
| ·转基因植株亚无性系的分子鉴定 | 第54页 |
| ·转基因植株亚无性系的抗病性鉴定 | 第54-57页 |
| ·田间病毒接种试验 | 第55页 |
| ·叶绿素含量及光合参数的测定 | 第55页 |
| ·抗性相关生理生化指标的测定 | 第55-57页 |
| 三 结果和分析 | 第57-84页 |
| 1 SCMV-FJ CP基因克隆及序列分析 | 第57-63页 |
| ·总RNA的完整性和纯度检测 | 第57页 |
| ·RT-PCR和目的片段的回收 | 第57-58页 |
| ·目的片段的克隆及重组质粒的鉴定 | 第58页 |
| ·序列的测定与分析 | 第58-63页 |
| 2 SCMV-CP基因遗传转化甘蔗 | 第63-71页 |
| ·甘蔗胚性愈伤组织的诱导及再生植株 | 第63-65页 |
| ·甘蔗对G418的敏感性 | 第65-66页 |
| ·基因枪介导的甘蔗遗传转化 | 第66-71页 |
| ·质粒DNA提取及分析 | 第66-68页 |
| ·受体材料的选择 | 第68页 |
| ·基因枪轰击参数 | 第68-69页 |
| ·转化体筛选和抗性植株获得 | 第69-71页 |
| 3 转化植株的分子鉴定 | 第71-77页 |
| ·基因组总DNA | 第71-72页 |
| ·PCR检测结果 | 第72-74页 |
| ·Southern杂交结果 | 第74页 |
| ·RT-PCR | 第74-75页 |
| ·转基因植株亚无性系的分子鉴定结果 | 第75-77页 |
| 4 转基因植株亚无性系的抗病性分析 | 第77-84页 |
| ·转基因植株亚无性系抗病性鉴定结果 | 第77-79页 |
| ·叶绿素含量及光合参数的变化 | 第79-80页 |
| ·抗性相关生理生化指标的变化 | 第80-84页 |
| ·POD酶活性的变化 | 第80-81页 |
| ·POD同工酶谱的变化 | 第81页 |
| ·SOD活性的变化 | 第81-82页 |
| ·CAT活性的变化 | 第82页 |
| ·MDA含量的变化 | 第82-84页 |
| 四 讨论 | 第84-89页 |
| 1 甘蔗花叶病毒(SCMV)株系分类 | 第84-85页 |
| 2 甘蔗花叶病防治及抗性育种 | 第85-86页 |
| 3 转SCMV-CP基因甘蔗的可能抗性机制 | 第86-87页 |
| 4 转基因植株的病毒抗性与活性氧代谢 | 第87-88页 |
| 5 利用转基因技术创造甘蔗新种资和产业化的可行性 | 第88-89页 |
| 五 小结 | 第89-92页 |
| 1 主要结论 | 第89-90页 |
| 2 本研究的主要创新点 | 第90-91页 |
| 3 进一步的研究工作计划及展望 | 第91页 |
| 4 在学期间发表的论文与专利情况 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-109页 |
| 附录 | 第109-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
