| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 前言 | 第7-21页 |
| 1 松材线虫病概述 | 第7-9页 |
| ·松材线虫的危害以及分布 | 第7-8页 |
| ·松材线虫形态学 | 第8-9页 |
| ·松材线虫生活史 | 第9页 |
| 2 松材线虫的检测技术研究进展 | 第9-13页 |
| ·形态学诊断 | 第9页 |
| ·寄主成分的化学方法诊断 | 第9-10页 |
| ·寄主物理方法诊断 | 第10页 |
| ·生物化学方法诊断 | 第10-11页 |
| ·分子生物学诊断 | 第11-13页 |
| 3 病原线虫的检测诊断技术研究进展 | 第13-19页 |
| ·随机扩增多态性DNA(RAPD) | 第13页 |
| ·扩增片断长度多态性(AFLP) | 第13页 |
| ·实时荧光PCR 检测技术 | 第13-17页 |
| ·基因芯片技术 | 第17-19页 |
| 4 我国研究松材线虫检测技术的迫切性 | 第19-20页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 材料和方法 | 第21-31页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| ·样品来源 | 第21页 |
| ·供试的载体、宿主菌株及载体 | 第21-22页 |
| ·供试酶类及试剂盒 | 第22页 |
| ·供试分子量标准 | 第22页 |
| ·供试生化及分子生物学试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·引物及探针 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-31页 |
| ·线虫的培养与分离 | 第22-23页 |
| ·线虫DNA 的不同抽提方法 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第24页 |
| ·PCR 反应产物电泳 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第25-27页 |
| ·测序 | 第27页 |
| ·实时 PCR 反应 | 第27-31页 |
| 结论 | 第31-38页 |
| 1 基因组 DNA 提取方法的确定 | 第31页 |
| 2 伞滑刃线虫属核糖体DNA ITS 区PCR 扩增结果 | 第31页 |
| 3 克隆测序以及 Clustal1.81 对比结果 | 第31-32页 |
| 4 探针筛选 | 第32页 |
| 5 实时荧光PCR 测试 | 第32-36页 |
| ·实时荧光PCR 的条件的优化 | 第32-34页 |
| ·探针灵敏度的检测 | 第34-35页 |
| ·探针专化性测试 | 第35-36页 |
| 6 松材线虫实时荧光检测体系的建立 | 第36-37页 |
| 7 松材线虫实时荧光检测与其他检测技术的比较 | 第37-38页 |
| 讨论 | 第38-41页 |
| 1 实时荧光PCR 用于松材线虫检测与普通PCR 的不同 | 第38页 |
| 2 线虫核糖体DNA 的提取 | 第38-39页 |
| 3 PCR 扩增中非特异扩增问题 | 第39-40页 |
| 4 影响探针灵敏度的几个可能的因素 | 第40页 |
| 5 检测中其他影响因素 | 第40页 |
| 6 不同检测技术的差异 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 英文文摘 | 第44-45页 |
| 缩写词 | 第45-46页 |
| 附录 | 第46-52页 |
