| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-14页 |
| 一、 蛋白酶概况 | 第7-8页 |
| 二、 嗜热蛋白酶及其来源 | 第8页 |
| 三、 嗜热蛋白酶的特点 | 第8-9页 |
| 四、 嗜热蛋白酶的稳定机制 | 第9-10页 |
| 五、 嗜热蛋白酶的基因及其克隆策略 | 第10-11页 |
| 六、 嗜热蛋白酶的生产 | 第11页 |
| 七、 嗜热蛋白酶的提取和纯化 | 第11-12页 |
| 八、 嗜热蛋白酶的应用 | 第12-13页 |
| 九、 嗜热蛋白酶研究中存在的问题和国内研究现状 | 第13页 |
| 十、 本研究的目的和内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-30页 |
| 1． 材料 | 第14-17页 |
| 1．1 样品 | 第14页 |
| 1．2 菌株与质粒 | 第14-15页 |
| 1．3 培养基 | 第15页 |
| 1．4 常用溶液、缓冲液 | 第15-16页 |
| 1．5 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 2． 方法 | 第17-30页 |
| 2．1 样品采集 | 第17页 |
| 2．2 样品处理 | 第17页 |
| 2．3 菌株筛选 | 第17-18页 |
| 2．4 菌株保存 | 第18页 |
| 2．5 菌株的鉴定 | 第18-20页 |
| 2．5．1 常规方法 | 第18页 |
| 2．5．2 16SrDNA序列分析法 | 第18-20页 |
| 2．6 菌株生长特性的测定 | 第20-21页 |
| 2．7 产酶条件的研究 | 第21-24页 |
| 2．8 酶在细胞内外的分布 | 第24-25页 |
| 2．9 粗酶制取 | 第25页 |
| 2．10 DNA提取 | 第25-27页 |
| 2．11 DNA溶液中蛋白质及RNA的去除 | 第27-28页 |
| 2．12 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2．13 电洗脱法回收DNA片段 | 第28-29页 |
| 2．14 DNA连接 | 第29页 |
| 2．15 DNA限制性内切酶酶切 | 第29页 |
| 2．16 感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2．17 质粒DNA的转化 | 第29-30页 |
| 第三章 结果 | 第30-49页 |
| 3．1 产嗜热蛋白酶的菌株 | 第30-33页 |
| 3．2 DPE_7─ 一株芽孢杆菌（Bacillus sp） | 第33-36页 |
| 3．3 Bacillus sp．DPE_7的生长条件 | 第36-38页 |
| 3．3．1 菌株生长的最适碳源 | 第36-37页 |
| 3．3．2 菌株生长的最适氮源 | 第37页 |
| 3．3．3 菌株生长的最适碳氮比 | 第37页 |
| 3．3．4 菌株生长的最适NaCl浓度 | 第37页 |
| 3．3．5 菌株生长的最适温度 | 第37-38页 |
| 3．3．6 菌株生长的最适pH值 | 第38页 |
| 3．3．7 菌株生长的最适培养转速 | 第38页 |
| 3．4 Bacillus sp．DPE_7的产酶条件 | 第38-43页 |
| 3．4．1 碳源与酶活 | 第38-39页 |
| 3．4．2 葡萄糖浓度与酶活 | 第39页 |
| 3．4．3 氮源与酶活 | 第39页 |
| 3．4．4 碳氮比与酶活 | 第39-40页 |
| 3．4．5 Mn~（2+）与酶活 | 第40页 |
| 3．4．6 Ca~（2+）与酶活 | 第40-41页 |
| 3．4．7 吐温与酶活 | 第41页 |
| 3．4．8 初始pH与酶活 | 第41-42页 |
| 3．4．9 转速与酶活 | 第42页 |
| 3．4．10 菌体生长与酶活 | 第42-43页 |
| 3．4．11 初始菌液接种量与酶活 | 第43页 |
| 3．5 酶在细胞内外的分布 | 第43-44页 |
| 3．6 酶的性质 | 第44-49页 |
| 3．6．1 粗蛋白酶作用的最适pH值 | 第44页 |
| 3．6．2 粗蛋白酶作用的最适温度 | 第44-45页 |
| 3．6．3 粗蛋白酶的pH稳定性 | 第45页 |
| 3．6．4 粗蛋白酶酶的热稳定性 | 第45-46页 |
| 3．6．5 Ca~（2+）与粗蛋白酶的热稳定性 | 第46页 |
| 3．6．6 有机溶剂与粗蛋白酶的热稳定性 | 第46-47页 |
| 3．6．7 抑制剂与粗蛋白酶酶活 | 第47-48页 |
| 3．6．8 蛋白质变性剂与粗蛋白酶酶活 | 第48-49页 |
| 第四章 总结 | 第49-51页 |
| 第五章 研究中存在的问题与下一步的研究设想 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
