| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-31页 |
| 综述一 MX基因及其蛋白的研究进展 | 第9-17页 |
| 1 MX 基因及其蛋白的发现和命名 | 第9页 |
| 2 MX 蛋白的结构 | 第9-10页 |
| 3 不同动物的MX 蛋白及其抗病毒功能 | 第10-12页 |
| 4 MX 蛋白抗病毒机理 | 第12-14页 |
| 5 禽类MX 蛋白的研究进展 | 第14-15页 |
| 6 MX 蛋白的应用和展望 | 第15-17页 |
| ·Mx 表达用于病毒感染鉴别诊断 | 第15-16页 |
| ·Mx 蛋白用于IFN 效价测定和疗效判定 | 第16页 |
| ·Mx 蛋白制剂的开发 | 第16页 |
| ·与病毒疫苗一起用于动物免疫 | 第16页 |
| ·应用于抗病育种 | 第16-17页 |
| 综述二 转基因动物的研究进展 | 第17-31页 |
| 1 转基因动物的制作方法 | 第18-22页 |
| ·转基因动物的常用制作方法 | 第18-21页 |
| ·转基因动物新技术和策略 | 第21-22页 |
| 2 转基因动物的检测方法 | 第22-26页 |
| ·染色体和基因水平 | 第22-23页 |
| ·转录水平 | 第23-24页 |
| ·翻译水平 | 第24-25页 |
| ·转基因动物整体表型的观察 | 第25-26页 |
| 3 转基因动物的应用 | 第26-29页 |
| ·转基因动物在基础理论方面的应用 | 第26页 |
| ·转基因动物在医药领域中的应用 | 第26-28页 |
| ·转基因动物在农业领域中的应用 | 第28-29页 |
| ·转基因动物在环保方面的应用 | 第29页 |
| 4 转基因动物存在的问题 | 第29-31页 |
| ·制作转基因动物的效率低、成本高 | 第29-30页 |
| ·转基因在宿主基因组中的行为难以控制 | 第30页 |
| ·转基因动物的安全性问题 | 第30-31页 |
| 第二章 研究报告 | 第31-67页 |
| 实验一 鸡抗病毒MX 基因的克隆与序列分析 | 第31-39页 |
| 1 材料 | 第32页 |
| ·SPF 鸡胚 | 第32页 |
| ·载体与菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| ·引物设计与RT-PCR | 第32-33页 |
| ·鸡胚成纤维细胞的分离与培养 | 第33页 |
| ·细胞诱导及细胞总RNA 的提取 | 第33页 |
| ·北京白鸡Mx 基因克隆与鉴定 | 第33页 |
| ·不同品系鸡Mx 基因核苷酸系统进化树的构建 | 第33页 |
| ·不同品系鸡Mx 蛋白的氨基酸变异分析 | 第33页 |
| ·不同种属动物Mx 基因的同源性分析 | 第33-34页 |
| ·Mx 蛋白特征性功能结构分析 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-37页 |
| ·RT-PCR 扩增北京白鸡Mx 基因 | 第34页 |
| ·北京白鸡Mx 基因克隆与测序分析 | 第34-35页 |
| ·不同品系鸡Mx 基因的核苷酸系统进化树 | 第35页 |
| ·北京白鸡与其他品系鸡Mx 蛋白氨基酸差异分析 | 第35-36页 |
| ·北京白鸡Mx 基因与其它动物Mx 基因的核苷酸和氨基酸比较分析 | 第36页 |
| ·Mx 蛋白特征性功能结构 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 实验二 重组鸡MX 基因真核表达质粒的构建及抑制禽流感病毒复制的研究 | 第39-50页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| ·实验室设备 | 第40页 |
| ·病毒毒株、细胞 | 第40页 |
| ·载体、菌株与质粒 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要实验仪器 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-44页 |
| ·pcDNA?6.2-GW/EmGFP-miR 表达载体多克隆位点的改造 | 第41页 |
| ·鸡Mx 基因扩增引物的设计 | 第41-42页 |
| ·鸡Mx 基因重组真核表达质粒的构建 | 第42页 |
| ·禽流感病毒的繁殖 | 第42页 |
| ·重组真核表达质粒的准备和细胞的转染 | 第42页 |
| ·细胞接毒 | 第42页 |
| ·Mx 基因在重组质粒pcDNA6.2/EmGFP-Mx 转染细胞中的表达检测 | 第42-43页 |
| ·HA 评价Mx 抑制禽流感病毒增殖的效果 | 第43页 |
| ·Real time RT-PCR 检测禽流感病毒P82 基因的拷贝数 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-48页 |
| ·真核表达载体pcDNA6.2/EmGFP 的多克隆位点 | 第44页 |
| ·鸡Mx 基因重组真核表达质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·质粒转染细胞的效率 | 第45-46页 |
| ·Mx 基因在重组质粒转染细胞中的表达检测 | 第46-47页 |
| ·HA 检测Mx 抑制禽流感病毒增殖的能力 | 第47页 |
| ·Real-time RT-PCR 检测Mx 蛋白对P82 基因的抑制 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 实验三 表达鸡抗病毒MX 基因转基因小鼠的制备 | 第50-59页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| ·实验用基础质粒 | 第51页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要实验仪器 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-55页 |
| ·显微注射用基因片段的制备 | 第52页 |
| ·转基因试验用小鼠的制备 | 第52页 |
| ·受精卵的采集 | 第52-53页 |
| ·显微注射 | 第53页 |
| ·胚胎移植 | 第53页 |
| ·转基因小鼠的检测 | 第53-55页 |
| 3 结果 | 第55-57页 |
| ·转基因小鼠的制备 | 第55页 |
| ·转基因小鼠的鉴定 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 实验四 鸡MX 基因慢病毒载体的构建及重组慢病毒的制备 | 第59-67页 |
| 1 材料 | 第60-61页 |
| ·实验室设备 | 第60页 |
| ·质粒、载体与菌株 | 第60页 |
| ·细胞 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-62页 |
| ·重组鸡Mx 基因的慢病毒载体的构建 | 第61页 |
| ·重组鸡Mx 基因慢病毒的制备 | 第61-62页 |
| ·重组慢病毒感染滴度的检测 | 第62页 |
| ·重组慢病毒感染细胞中Mx 基因表达的检测 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-64页 |
| ·重组慢病毒表达质粒pLenti6/EmGFP-Mx 的鉴定 | 第62-63页 |
| ·重组慢病毒颗粒的制备及感染滴度的检测结果 | 第63页 |
| ·重组慢病毒感染细胞中Mx 基因表达 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 第三章 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82页 |
