| 本论文的创新性工作 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第15-23页 |
| 第一章 病毒脱氧尿苷焦磷酸酶研究进展 | 第15-23页 |
| 1 鸭瘟病毒的分子特征概况 | 第15页 |
| 2 病毒脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTPase)研究进展 | 第15-20页 |
| ·脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTPase)的分类及特征分析 | 第16-17页 |
| ·脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTPase)的表达与调控 | 第17-18页 |
| ·脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTPase)的分布与定位 | 第18页 |
| ·病毒脱氧尿苷焦磷酸酶(dUTPase)功能研究概况 | 第18-20页 |
| ·展望 | 第20页 |
| 3 选题目的和意义 | 第20-23页 |
| 第二部分 试验研究 | 第23-107页 |
| 第二章 鸭瘟病毒dUTPase基因序列特征及密码子偏爱性分析 | 第23-35页 |
| 1 数据与方法 | 第23-25页 |
| ·数据 | 第23-25页 |
| ·分析方法 | 第25页 |
| 2 结果 | 第25-33页 |
| ·DPV dUTPase基因特征分析 | 第25-27页 |
| ·DPV以及32个疱疹病毒dUTPase基因参考序列密码子使用偏爱分析 | 第27-29页 |
| ·DPV dUTPase基因密码子使用频率和氨基酸组成偏爱分析 | 第29页 |
| ·DPV dUTPase基因与大肠杆菌、酵母及人的密码子使用偏爱性比较 | 第29-33页 |
| 3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 鸭瘟病毒dUTPase基因克隆表达及多克隆抗体的制备 | 第35-53页 |
| 1 数据与方法 | 第35-38页 |
| ·菌株/载体 | 第35页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·主要试剂及配制 | 第35-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·其它 | 第37-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-44页 |
| ·PCR扩增鸭瘟病毒CHv株dUTPase基因 | 第38-39页 |
| ·dUTPase基因的T-载体克隆与鉴定 | 第39页 |
| ·表达载体的构建 | 第39页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·兔高免血清的制备 | 第41-43页 |
| ·ELISA检测兔抗dUTPase抗体效价 | 第43页 |
| ·兔抗dUTPase IgG的纯化及鉴定 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-49页 |
| ·鸭瘟病毒dUTPase基因的扩增 | 第44页 |
| ·dUTPase基因的T-克隆与鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组表达质粒pET-32-DUT的构建 | 第45页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第45-47页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第47页 |
| ·免疫兔血清的Western-blot检测 | 第47-48页 |
| ·兔抗dUTPase血清ELISA效价的检测 | 第48页 |
| ·兔抗dUTPase IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| ·基因表达引物的设计 | 第49-50页 |
| ·诱导表达 | 第50-51页 |
| ·抗血清的制备及纯化 | 第51-53页 |
| 第四章 鸭瘟强毒体外感染宿主细胞dUTPase基因转录及表达时相分析 | 第53-69页 |
| 1 材料 | 第53-56页 |
| ·菌株/毒株/细胞 | 第53页 |
| ·主要试剂及配制 | 第53-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·其它 | 第55-56页 |
| 2 实验方法 | 第56-60页 |
| ·鸭瘟病毒体外感染宿主细胞dUTPase基因的转录时相分析 | 第56-58页 |
| ·鸭瘟病毒体外感染宿主细胞dUTPase基因的表达时相分析 | 第58-60页 |
| 3 结果 | 第60-62页 |
| ·DPV dUTPase基因在宿主细胞的转录时相分析 | 第60-61页 |
| ·DPV dUTPase基因产物在宿主细胞的表达时相分析 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-69页 |
| ·关于Dot-blot转录时相分析 | 第63-65页 |
| ·关于Western-blot表达时相分析 | 第65-69页 |
| 第五章 鸭瘟强毒dUTPase基因产物在宿主细胞中的表达与亚细胞定位 | 第69-79页 |
| 1 材料 | 第69-70页 |
| ·毒株/细胞 | 第69页 |
| ·主要试剂及配制 | 第69页 |
| ·主要仪器设备 | 第69-70页 |
| 2 实验方法 | 第70-71页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV dUTPase亚细胞定位方法的建立及优化 | 第70-71页 |
| ·DPV dUTPase基因产物亚细胞定位的动态监测 | 第71页 |
| 3 结果 | 第71-76页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV dUTPase亚细胞定位方法的建立及优化 | 第71-73页 |
| ·DPV dUTPase基因产物亚细胞定位的动态监测 | 第73-76页 |
| 4 讨论 | 第76-79页 |
| ·关于蛋白定位研究的方法 | 第76页 |
| ·病毒dUTPase感染宿主亚细胞的定位分析 | 第76-77页 |
| ·关于DPV dUTPase在宿主亚细胞定位的时相分析 | 第77-78页 |
| ·DPV dUTPase宿主亚细胞定位与病毒增殖相关性的初步探讨 | 第78-79页 |
| 第六章 鸭瘟强毒dUTPase基因产物在人工感染鸭组织中的表达与定位分布 | 第79-107页 |
| 1 材料 | 第79-80页 |
| ·毒株/试验动物 | 第79页 |
| ·主要试剂及配制 | 第79-80页 |
| ·主要仪器设备 | 第80页 |
| 2 实验方法 | 第80-85页 |
| ·人工感染动物试验 | 第80-81页 |
| ·间接免疫荧光检测石蜡切片中DPV dUTPase方法的建立与优化 | 第81-83页 |
| ·免疫酶组织化学检测DPV dUTPase组织定位方法的建立及优化 | 第83-85页 |
| 3 结果 | 第85-99页 |
| ·人工感染鸭瘟强毒后鸭的临床症状及大体解剖病理变化 | 第85-86页 |
| ·间接免疫荧光检测石蜡切片中DPV dUTPase在鸭组织的定位 | 第86-92页 |
| ·间接免疫组化检测石蜡切片中DPV dUTPase在鸭组织的定位 | 第92-99页 |
| 4 讨论 | 第99-107页 |
| ·间接免疫荧光和间接免疫组化方法的建立与优化 | 第99-101页 |
| ·不同方法检测DPV dUTPase在人工感染鸭体内表达及分布规律比较 | 第101-102页 |
| ·DPV dUTPase在人工感染鸭体内组织分布检测意义的初步探讨 | 第102-104页 |
| ·DPV dUTPase在鸭体内组织亚细胞定位与病毒基因功能相关性初探 | 第104-105页 |
| ·DPV dUTPase在鸭体内组织细胞嗜性与基因功能相关性初探 | 第105-107页 |
| 第三部分 结论 | 第107-109页 |
| 第四部分 参考文献 | 第109-117页 |
| 附录 | 第117-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第122页 |
