| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 文献综述 | 第12-43页 |
| 第一章 NANOG 基因和ES 细胞多能性研究进展 | 第12-32页 |
| ·NANOG 基因的发现 | 第12页 |
| ·NANOG 基因结构 | 第12-13页 |
| ·NANOG 基因的表达 | 第13页 |
| ·NANOG 基因的功能 | 第13-15页 |
| ·Nanog 与ES 细胞多能性维持 | 第13-14页 |
| ·Nanog 与自我更新 | 第14页 |
| ·Nanog 与肿瘤发生 | 第14-15页 |
| ·Nanog 与体细胞重编程 | 第15页 |
| ·多能性胚胎细胞系和ES 细胞产生 | 第15页 |
| ·ES 细胞的增殖和分化 | 第15-16页 |
| ·通过抑制ES 细胞分化进行自我更新 | 第16-18页 |
| ·通过增殖促进ES 细胞自我更新 | 第18-20页 |
| ·ES 细胞维持自我更新的分子机制 | 第20-22页 |
| ·自我更新的转录因子网络 | 第22-23页 |
| ·确定ES 细胞多能性的分子机制 | 第23-25页 |
| ·建立体细胞的多能性 | 第25-26页 |
| ·OCT-3/4, SOX2, C-MYC 以及 KLF4 引发的重编程 | 第26-27页 |
| ·OCT-3/4, SOX2, C-MYC 以及 KLF4 的功能 | 第27-32页 |
| ·Oct-3/4 的功能 | 第27-28页 |
| ·Sox2 的功能 | 第28页 |
| ·c-Myc 的功能 | 第28-29页 |
| ·Klf4 的功能 | 第29-30页 |
| ·因子诱导多能性干细胞的机制 | 第30-32页 |
| 第二章 有蹄类家畜胚胎干细胞研究进展及面临的挑战 | 第32-43页 |
| ·家畜ES 细胞系 | 第33-34页 |
| ·ES 细胞系的界定 | 第34-35页 |
| ·ES 细胞的培养特性 | 第35-36页 |
| ·ES 细胞的分子标志 | 第36-37页 |
| ·有蹄类家畜ES 细胞建系面临的挑战 | 第37-41页 |
| ·ES 细胞识别 | 第37-38页 |
| ·分离和原代培养的时间选择 | 第38-39页 |
| ·细胞克隆的传代 | 第39页 |
| ·自发分化 | 第39-40页 |
| ·诱导分化, | 第40-41页 |
| ·可能的解决途径 | 第41-43页 |
| ·遗传操作 | 第41页 |
| ·细胞因子和培养条件 | 第41-43页 |
| 试验研究 | 第43-82页 |
| 第三章 牛NAONG 基因原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达 | 第43-61页 |
| ·引言 | 第43-44页 |
| ·材料与方法 | 第44-54页 |
| ·主要实验仪器 | 第44页 |
| ·主要实验材料和试剂 | 第44页 |
| ·常用溶液配制 | 第44-46页 |
| ·目的片段克隆与测序 | 第46-51页 |
| ·牛Nanog 基因原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中诱导表达 | 第52-53页 |
| ·表达产物的检测 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-59页 |
| ·牛Nanog 目的片段克隆与测序 | 第54页 |
| ·原核表达载体构建和鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第55-59页 |
| ·Nanog 蛋白免疫印迹(Western blotting) 检测 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第四章 牛NANOG 基因克隆及其在皮肤成纤维细胞中的表达 | 第61-70页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-65页 |
| ·主要仪器设备 | 第61-62页 |
| ·主要实验材料和试剂 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-65页 |
| ·结果 | 第65-68页 |
| ·Nanog 真核表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·G418 对牛皮肤成纤维细胞最小致死量的确定 | 第66页 |
| ·pEGFP-Nanog 和pFLAG-Nanog 质粒稳定转染的阳性细胞株筛选 | 第66-67页 |
| ·牛Nanog 基因在皮肤成纤维细胞中的m RNA 表达 | 第67-68页 |
| ·GFP/FLAG-Nanog 融合蛋白在成纤维细胞中的表达 | 第68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第五章 转基因供核细胞的多能性检测及核移植 | 第70-82页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·材料与方法 | 第71-73页 |
| ·主要仪器设备 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-73页 |
| ·结果 | 第73-79页 |
| ·免疫染色 | 第73-74页 |
| ·流式细胞仪检测干细胞表面标志 | 第74-76页 |
| ·类胚体形成和三个胚层分化标志检测 | 第76-78页 |
| ·转基因克隆胚胎的体外发育 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 结论 | 第82页 |
| 本研究的创新点与进一步研究的课题 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-97页 |
| 致谢 | 第97-99页 |
| 作者简介 | 第99页 |
