摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-11页 |
第一章 前言 | 第11-43页 |
第一节 抗菌肽的研究进展 | 第11-28页 |
·抗菌肽的基本特性 | 第11页 |
·抗菌肽的种类和结构 | 第11-16页 |
·抗菌肽生物学效应及机制研究 | 第16-23页 |
·对微生物等的直接杀灭或抑制作用 | 第16-21页 |
·抗菌肽的免疫防御作用 | 第21-23页 |
·抗菌肽基因的表达与调控 | 第23-25页 |
·基因定位 | 第23页 |
·基因调控与机制 | 第23-25页 |
·抗菌肽的开发与应用前景 | 第25-28页 |
·药物开发 | 第25-26页 |
·转基因生物和抗病品种培育 | 第26-27页 |
·保鲜剂和饲料添加剂 | 第27-28页 |
第二节 海洋抗菌肽研究进展 | 第28-35页 |
·海洋抗菌肽的种类与结构 | 第28-31页 |
·海洋抗菌肽的功能 | 第31-32页 |
·海洋抗菌肽的基因克隆 | 第32-33页 |
·抗菌肽的免疫防御与基因表达 | 第33-34页 |
·海洋抗菌肽的重组表达 | 第34-35页 |
第三节 毕赤酵母体外重组表达系统 | 第35-40页 |
·巴斯德毕赤酵母细胞的基本特性 | 第36-38页 |
·影响外源蛋白表达的因素 | 第38-39页 |
·毕赤酵母表达系统的应用与展望 | 第39-40页 |
第四节 研究目的、意义和内容 | 第40-43页 |
·鲍和扇贝的养殖现状与存在问题 | 第40-42页 |
·鲍 | 第40-41页 |
·扇贝 | 第41-42页 |
·研究意义和内容 | 第42-43页 |
第二章 栉孔扇贝抗菌肽分离纯化 | 第43-53页 |
1 材料与方法 | 第44-45页 |
·样品采集 | 第44页 |
·酸性提取 | 第44页 |
·固相提取(SPE) | 第44-45页 |
·HPLC 纯化 | 第45页 |
·微生物检测 | 第45页 |
·测序 | 第45页 |
2 结果 | 第45-50页 |
·诱导与粗提 | 第45-46页 |
·稻瘟真菌模型实验 | 第46-47页 |
·抗菌肽纯化 | 第47-50页 |
·序列测定 | 第50页 |
3 讨论 | 第50-53页 |
第三章 皱纹盘鲍防御素和基因表达 | 第53-62页 |
第一节 皱纹盘鲍防御素及cDNA 序列分析 | 第53-57页 |
·材料与方法 | 第53-54页 |
·结果 | 第54-57页 |
·讨论 | 第57页 |
第二节 皱纹盘鲍防御素基因表达 | 第57-62页 |
·材料与方法 | 第57-60页 |
·实验动物和试剂 | 第57-58页 |
·总RNA 的提取 | 第58页 |
·cDNA 合成 | 第58-59页 |
·半定量rt-PCR 扩增 | 第59-60页 |
·结果 | 第60页 |
·讨论 | 第60-62页 |
第四章 皱纹盘鲍防御素(hd-def)的基因组克隆与结构分析.. | 第62-77页 |
1 材料和方法 | 第62-66页 |
·实验动物与试剂 | 第62页 |
·基因组DNA 提取 | 第62-63页 |
·hd-def 编码区基因组克隆 | 第63-64页 |
·侧翼序列的基因组克隆 | 第64页 |
·PCR 扩增产物回收、转化、测序 | 第64-66页 |
·鲍防御素基因组结构分析 | 第66页 |
2 结果 | 第66-70页 |
·h d-def 的基因组克隆 | 第66-69页 |
·鲍防御素基因组结构 | 第69-70页 |
3 讨论 | 第70-77页 |
第五章 皱纹盘鲍防御素重组表达 | 第77-98页 |
1 材料和方法 | 第77-91页 |
·表达载体和培养基 | 第77-81页 |
·目的基因的获得 | 第81-82页 |
·过渡载体pPIC 9-hddef 的构建 | 第82-84页 |
·碱裂解法大量提取质粒pPIC9 | 第82-83页 |
·质粒pPIC9 的双酶切 | 第83页 |
·连接反应和转化 | 第83-84页 |
·表达载体pPIC9k-hddef 的构建 | 第84-85页 |
·毕赤酵母电转化和阳性转化子筛选 | 第85-88页 |
·重组表达质粒pPIc9k-hddef 的线性化 | 第85页 |
·重组表达质粒脱磷酸化处理 | 第85-86页 |
·感受态酵母制备 | 第86-87页 |
·电击转化 | 第87页 |
·毕赤酵母基因组提取和PCR 鉴定重组子 | 第87-88页 |
·重组酵母的诱导表达 | 第88-89页 |
·酵母表达外源蛋白质的SDS-PAGE | 第89-91页 |
·重组表达产物的活性检测 | 第91页 |
2 结果 | 第91-95页 |
·表达载体的构建 | 第91-93页 |
·转化与诱导表达 | 第93-94页 |
·生物学活性 | 第94-95页 |
3 讨论 | 第95-98页 |
总结 | 第98-99页 |
参考文献 | 第99-114页 |
个人简历 | 第114页 |
博士论文期间发表和完成论文 | 第114-116页 |
致谢 | 第116页 |