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皱纹盘鲍和栉孔扇贝抗菌肽的研究

摘要第1-6页
Abstract第6-11页
第一章 前言第11-43页
 第一节 抗菌肽的研究进展第11-28页
   ·抗菌肽的基本特性第11页
   ·抗菌肽的种类和结构第11-16页
   ·抗菌肽生物学效应及机制研究第16-23页
     ·对微生物等的直接杀灭或抑制作用第16-21页
     ·抗菌肽的免疫防御作用第21-23页
   ·抗菌肽基因的表达与调控第23-25页
     ·基因定位第23页
     ·基因调控与机制第23-25页
   ·抗菌肽的开发与应用前景第25-28页
     ·药物开发第25-26页
     ·转基因生物和抗病品种培育第26-27页
     ·保鲜剂和饲料添加剂第27-28页
 第二节 海洋抗菌肽研究进展第28-35页
   ·海洋抗菌肽的种类与结构第28-31页
   ·海洋抗菌肽的功能第31-32页
   ·海洋抗菌肽的基因克隆第32-33页
   ·抗菌肽的免疫防御与基因表达第33-34页
   ·海洋抗菌肽的重组表达第34-35页
 第三节 毕赤酵母体外重组表达系统第35-40页
   ·巴斯德毕赤酵母细胞的基本特性第36-38页
   ·影响外源蛋白表达的因素第38-39页
   ·毕赤酵母表达系统的应用与展望第39-40页
 第四节 研究目的、意义和内容第40-43页
   ·鲍和扇贝的养殖现状与存在问题第40-42页
     ·鲍第40-41页
     ·扇贝第41-42页
   ·研究意义和内容第42-43页
第二章 栉孔扇贝抗菌肽分离纯化第43-53页
 1 材料与方法第44-45页
   ·样品采集第44页
   ·酸性提取第44页
   ·固相提取(SPE)第44-45页
   ·HPLC 纯化第45页
   ·微生物检测第45页
   ·测序第45页
 2 结果第45-50页
   ·诱导与粗提第45-46页
   ·稻瘟真菌模型实验第46-47页
   ·抗菌肽纯化第47-50页
   ·序列测定第50页
 3 讨论第50-53页
第三章 皱纹盘鲍防御素和基因表达第53-62页
 第一节 皱纹盘鲍防御素及cDNA 序列分析第53-57页
   ·材料与方法第53-54页
   ·结果第54-57页
   ·讨论第57页
 第二节 皱纹盘鲍防御素基因表达第57-62页
   ·材料与方法第57-60页
     ·实验动物和试剂第57-58页
     ·总RNA 的提取第58页
     ·cDNA 合成第58-59页
     ·半定量rt-PCR 扩增第59-60页
   ·结果第60页
   ·讨论第60-62页
第四章 皱纹盘鲍防御素(hd-def)的基因组克隆与结构分析..第62-77页
 1 材料和方法第62-66页
   ·实验动物与试剂第62页
   ·基因组DNA 提取第62-63页
   ·hd-def 编码区基因组克隆第63-64页
   ·侧翼序列的基因组克隆第64页
   ·PCR 扩增产物回收、转化、测序第64-66页
   ·鲍防御素基因组结构分析第66页
 2 结果第66-70页
     ·h d-def 的基因组克隆第66-69页
   ·鲍防御素基因组结构第69-70页
 3 讨论第70-77页
第五章 皱纹盘鲍防御素重组表达第77-98页
 1 材料和方法第77-91页
   ·表达载体和培养基第77-81页
   ·目的基因的获得第81-82页
   ·过渡载体pPIC 9-hddef 的构建第82-84页
     ·碱裂解法大量提取质粒pPIC9第82-83页
     ·质粒pPIC9 的双酶切第83页
     ·连接反应和转化第83-84页
   ·表达载体pPIC9k-hddef 的构建第84-85页
   ·毕赤酵母电转化和阳性转化子筛选第85-88页
     ·重组表达质粒pPIc9k-hddef 的线性化第85页
     ·重组表达质粒脱磷酸化处理第85-86页
     ·感受态酵母制备第86-87页
     ·电击转化第87页
     ·毕赤酵母基因组提取和PCR 鉴定重组子第87-88页
   ·重组酵母的诱导表达第88-89页
   ·酵母表达外源蛋白质的SDS-PAGE第89-91页
   ·重组表达产物的活性检测第91页
 2 结果第91-95页
   ·表达载体的构建第91-93页
   ·转化与诱导表达第93-94页
   ·生物学活性第94-95页
 3 讨论第95-98页
总结第98-99页
参考文献第99-114页
个人简历第114页
博士论文期间发表和完成论文第114-116页
致谢第116页

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