| 摘要 | 第1-6页 |
| SUMMARY | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 CD 分子及其单克隆抗体 | 第13-25页 |
| 1 CD 分子的研究进展 | 第13-16页 |
| ·白细胞分化抗原与CD 分子 | 第13-14页 |
| ·CD 分子的分类与分组 | 第14页 |
| ·LDΑ分子的跨膜类型与其结构域 | 第14-15页 |
| ·CD 与CDmΑb 的功能与其应用 | 第15-16页 |
| ·在基础免疫学中 | 第15页 |
| ·在临床免疫学研究中 | 第15-16页 |
| 2 CD 与单克隆抗体技术 | 第16-20页 |
| ·单克隆抗体制备技术的研究进展 | 第16-17页 |
| ·单克隆抗体在CD 分子相关研究中的应用 | 第17-20页 |
| ·用于免疫功能监测与疾病诊断 | 第17-18页 |
| ·用于疾病治疗 | 第18页 |
| ·用于CD 分子与其相关基础研究 | 第18-20页 |
| 3 CD8 分子的研究进展 | 第20-24页 |
| ·编码CD8 分子的基因 | 第20-21页 |
| ·CD8 分子结构 | 第21-22页 |
| ·CD8α链的分子结构 | 第21页 |
| ·CD8β链的分子结构 | 第21-22页 |
| ·CD8 分子的分布 | 第22页 |
| ·CD8 分子的配体与CD8 相关的分子 | 第22页 |
| ·CD8 分子的功能 | 第22-24页 |
| ·CD8 附粘分子的作用及共受体功能 | 第22-23页 |
| ·CD8 的转导信号功能 | 第23-24页 |
| ·抗排斥反应 | 第24页 |
| 4 猪CD8 的研究价值与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 猪CD8β分子重组蛋白的表达、纯化与免疫活性鉴定 | 第25-40页 |
| 1 实验材料 | 第25-27页 |
| ·菌种、载体与实验动物 | 第25页 |
| ·酶与试剂 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·溶液配制 | 第26-27页 |
| ·仪器与设备 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-34页 |
| ·猪CD8β原核表达载体的构建 | 第27-31页 |
| ·表达引物的设计 | 第27-28页 |
| ·目的片段的PCR 扩增 | 第28页 |
| ·PCR 产物凝胶回收与纯化（按试剂盒说明进行） | 第28页 |
| ·目的片段和载体的酶切与回收 | 第28-29页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·重组质粒的提取（柱式小量质粒提取纯化试剂盒） | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组菌的诱导表达与表达条件的优化 | 第31-32页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第31页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第31页 |
| ·表达条件的优化 | 第31-32页 |
| ·pET-28a-pCD8β高效表达产物的纯化 | 第32页 |
| ·DOC 洗涤法纯化包涵体 | 第32页 |
| ·纯化pET-28a-pCD8β蛋白SDS-PAGE 电泳分析 | 第32页 |
| ·切胶法纯化包涵体 | 第32页 |
| ·纯化pET-28a-pCD8β蛋白的免疫活性检测 | 第32-34页 |
| ·Western-blotting 分析 | 第32-33页 |
| ·纯化蛋白的ELISA 检测 | 第33页 |
| ·动物免疫实验 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-38页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第34页 |
| ·pCD8β融合蛋白表达条件优化的SDS-PAGE 分析 | 第34-35页 |
| ·包涵体经DOC 洗涤结果 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE 胶纯化与回收包涵体的效果 | 第36-37页 |
| ·免疫印迹分析 | 第37页 |
| ·ELISA 检测结果 | 第37页 |
| ·免疫动物血清效价的检测 | 第37-38页 |
| 4 分析与讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 pCD8β单克隆抗体的制备及鉴定 | 第40-55页 |
| 1 材料 | 第40-42页 |
| ·抗原、细胞系与实验动物 | 第40页 |
| ·试剂与耗材 | 第40-41页 |
| ·溶液与培养基 | 第41-42页 |
| ·仪器与设备 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-46页 |
| ·间接ELISA 法最佳抗原包被量及阳性血清最佳稀释度的确定 | 第42页 |
| ·细胞融合 | 第42-43页 |
| ·饲养细胞制备 | 第42-43页 |
| ·骨髓瘤细胞的复苏、培养与制备 | 第43页 |
| ·脾细胞的制备 | 第43页 |
| ·细胞融合 | 第43页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第43-44页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化、冻存与复苏 | 第44页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化 | 第44页 |
| ·细胞冻存 | 第44页 |
| ·细胞复苏 | 第44页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备与抗体纯化 | 第44-45页 |
| ·杂交瘤细胞与单克隆抗体特性的鉴定 | 第45-46页 |
| ·抗体亚类的测定 | 第45页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数目的统计分析 | 第45页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第45页 |
| ·腹水效价的测定 | 第45页 |
| ·Western-blotting 检测单克隆抗体特异性 | 第45-46页 |
| ·单克隆抗体对热稳定性试验 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-51页 |
| ·间接ELISA 法最佳抗原包被量及阳性血清稀释滴度的确定 | 第46-47页 |
| ·亚克隆和单克隆细胞株ELISA 检测结果 | 第47-48页 |
| ·杂交瘤细胞与单抗特性鉴定 | 第48-51页 |
| ·单抗的亚型鉴定 | 第48页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数目统计结果 | 第48页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第48-49页 |
| ·腹水效价的测定 | 第49-50页 |
| ·Western-blotting 检测单克隆抗体特异性 | 第50页 |
| ·单抗腹水热稳定性实验 | 第50-51页 |
| 4 分析与讨论 | 第51-55页 |
| ·抗原 | 第51页 |
| ·动物选择与免疫 | 第51-52页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第52页 |
| ·瘤细胞与融合 | 第52-53页 |
| ·杂交瘤抗体的检测 | 第53页 |
| ·克隆化 | 第53页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体 | 第53-54页 |
| ·杂交瘤细胞的特异性试验 | 第54页 |
| ·杂交瘤细胞的应用 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62-63页 |
| 导师简介 | 第63-65页 |
