| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 单核增多性李斯特菌研究进展 | 第9-16页 |
| 1 致病机理 | 第9-10页 |
| 2 单核增多性李斯特氏菌（LMO）的研究概况 | 第10-13页 |
| ·LMO 的发现 | 第10页 |
| ·李斯特氏菌的分型 | 第10-12页 |
| ·LMO 的传统表型亚分型法 | 第11页 |
| ·LMO 的分子亚分型 | 第11-12页 |
| ·形态与染色特性 | 第12页 |
| ·生化特性 | 第12页 |
| ·理化性质 | 第12-13页 |
| 3 LMO 的检测方法 | 第13-14页 |
| ·应用酶联免疫试验（ELISA）方法对该病的检测 | 第13-14页 |
| ·应用分子生物学技术对该病的检测 | 第14页 |
| ·核酸探针 | 第14页 |
| ·PCR 方法 | 第14页 |
| 4 LMO 防治措施 | 第14-16页 |
| ·加强饲养管理防治 | 第14-15页 |
| ·疫苗药物防治 | 第15-16页 |
| 第二章 单核增多性李斯特菌hly 基因的原核表达 | 第16-32页 |
| 1 材料 | 第16-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·菌株 | 第16页 |
| ·质粒 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·分子生物学试剂 | 第16-17页 |
| ·生化试剂 | 第17页 |
| ·仪器设备 | 第17页 |
| ·缓冲液和其他试剂溶液的配制 | 第17页 |
| 2 试验方法 | 第17-25页 |
| ·hly 基因片段的克隆与序列分析 | 第17-21页 |
| ·碱裂解法提取LMO 总DNA | 第17-18页 |
| ·引物的设计与合成 | 第18页 |
| ·PCR 扩增hly 基因 | 第18页 |
| ·目的片段的回收 | 第18-19页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第19页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第19页 |
| ·连接产物的转化 | 第19-20页 |
| ·重组质粒pMD18-T-hly 的提取与鉴定 | 第20-21页 |
| ·序列分析 | 第21页 |
| ·hly 基因原核表达载体的构建 | 第21-24页 |
| ·带有粘性末端hly 基因片段的制备 | 第21-22页 |
| ·带有粘性末端原核表达载体pGEX-6P-1 的制备 | 第22页 |
| ·目的片段hly 基因与线性化pEGX-6P-1 载体的连接 | 第22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22-23页 |
| ·阳性重组质粒pGEX-6P-hly 的筛选 | 第23页 |
| ·阳性重组质粒pGEX-6P-hly 的鉴定 | 第23-24页 |
| ·hly 基因在大肠杆菌中的表达 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌的诱导表达 | 第24页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第24-25页 |
| ·免疫印迹鉴定（Western blotting） | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-29页 |
| ·hly 基因的PCR 扩增结果 | 第25-26页 |
| ·pMD18-T-hly 重组质粒的酶切及PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·hly 基因测序结果与序列分析 | 第26-28页 |
| ·重组原核表达载体质粒的酶切及PCR 鉴定 | 第28页 |
| ·重组菌DH5α（pGEX-6p-1-hly）表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白pGEX-6p-1-hly Western blotting 分析 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-32页 |
| ·hly 基因的克隆与序列分析 | 第29-30页 |
| ·hly 基因的原核表达 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白的Western-blot 分析 | 第31-32页 |
| 第三章 单核增多性李斯特菌间接ELISA 检测方法的建立 | 第32-44页 |
| 1 材料 | 第32页 |
| ·菌株与试剂 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| ·抗原最佳包被液的选择 | 第32页 |
| ·重组抗原最适包被浓度和血清最适稀释度的确定 | 第32-33页 |
| ·酶标二抗最适稀释度的确定 | 第33页 |
| ·最适封闭液的选择 | 第33页 |
| ·封闭时间的优化 | 第33页 |
| ·血清稀释液的选择 | 第33页 |
| ·抗原和血清反应时间的优化 | 第33页 |
| ·显色时间的优化 | 第33页 |
| ·间接ELISA 方法操作程序的确定 | 第33页 |
| ·间接ELISA 方法阳性临界值的确定 | 第33-34页 |
| ·特异性和敏感性试验 | 第34页 |
| ·交叉性试验 | 第34页 |
| ·检测灵敏度试验 | 第34页 |
| ·重复性试验 | 第34页 |
| ·间接ELISA 方法的初步应用 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| ·抗原最佳包被液的选择 | 第34-35页 |
| ·重组抗原最适包被浓度和血清最适稀释度的确定 | 第35页 |
| ·诊断抗体最佳工作条件的测定 | 第35-36页 |
| ·酶标二抗最适稀释度的确定 | 第36页 |
| ·最适封闭液的选择 | 第36-37页 |
| ·封闭时间的选择 | 第37页 |
| ·血清稀释液的选择 | 第37-38页 |
| ·抗原和血清作用时间的选择 | 第38页 |
| ·显色时间的优化 | 第38页 |
| ·间接ELISA 方法操作程序的确定 | 第38-39页 |
| ·间接ELISA 方法阳性临界值的确定 | 第39页 |
| ·特异性实验和敏感性实验 | 第39页 |
| ·交叉性试验 | 第39-40页 |
| ·间接ELISA 方法灵敏度检测 | 第40页 |
| ·重复性试验 | 第40-41页 |
| ·批内重复性试验 | 第40-41页 |
| ·批间重复性试验 | 第41页 |
| ·间接ELISA 方法的初步应用 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·LMO 检测方法的比较 | 第42页 |
| ·间接ELISA 检测方法条件的优化 | 第42-43页 |
| ·间接ELISA 检测方法的应用 | 第43-44页 |
| 第四章 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-58页 |
| 英文缩略对照表 | 第51-52页 |
| 常用试剂的配制 | 第52-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
