抗牛γ-干扰素单克隆抗体制备和鉴定
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| ·干扰素的发现与分类 | 第12页 |
| ·IFN-γ的产生 | 第12-13页 |
| ·IFN-γ理化特征和分子结构 | 第13-14页 |
| ·IFN-γ理化特征 | 第13页 |
| ·IFN-γ基因及蛋白结构 | 第13-14页 |
| ·IFN-γ受体及信号转导 | 第14-15页 |
| ·IFN-γ受体 | 第14页 |
| ·IFN-γ信号传导途径 | 第14-15页 |
| ·IFN-γ分子生物学活性 | 第15-17页 |
| ·IFN-γ的抗病毒作用 | 第15页 |
| ·IFN-γ的抗肿瘤作用 | 第15-16页 |
| ·IFN-γ的免疫调节作用 | 第16-17页 |
| ·IFN-γ抗寄生虫作用 | 第17页 |
| ·IFN-γ应用的研究进展 | 第17-18页 |
| ·基因工程IFN-γ的研究 | 第17-18页 |
| ·IFN-γ免疫佐剂的研究 | 第18页 |
| ·牛 IFN-γ的研究进展 | 第18-19页 |
| ·牛 IFN-γ基因结构 | 第18-19页 |
| ·牛 IFN-γ应用研究进展 | 第19页 |
| ·抗 IFN-γ单克隆抗体的应用 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·质粒、菌株及载体 | 第21页 |
| ·实验动物及细胞 | 第21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22页 |
| ·主要溶液配制 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-33页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第23-26页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第26页 |
| ·重组蛋白 Western blot 检测 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白的纯化与浓度测定 | 第27-28页 |
| ·动物免疫 | 第28页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第28页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第28-30页 |
| ·杂交瘤细胞鉴定 | 第30-31页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第31-32页 |
| ·阻断 ELISA 检测单抗与天然干扰素的反应性 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-41页 |
| ·PCR 扩增BoIFN-γ目的基因 | 第33页 |
| ·BoIFN-γ原核表达载体构建结果 | 第33-34页 |
| ·重组 BoIFN-γ表达产物的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白 Western blot 检测结果 | 第35-36页 |
| ·间接 ELISA 筛选方法的建立 | 第36页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选结果 | 第36页 |
| ·杂交瘤细胞株的鉴定 | 第36-38页 |
| ·杂交瘤细胞染色体数分析 | 第36-37页 |
| ·杂交瘤细胞稳定性分析 | 第37-38页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第38-40页 |
| ·单克隆抗体 Ig 亚类的鉴定 | 第38页 |
| ·腹水mAb 效价的测定 | 第38页 |
| ·Western blot 鉴定 | 第38页 |
| ·mAb 特异性鉴定 | 第38-39页 |
| ·间接免疫荧光分析 | 第39-40页 |
| ·阻断 ELISA 检测天然干扰素 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-45页 |
| ·免疫原和检测抗原的制备 | 第41页 |
| ·小鼠免疫程序 | 第41-42页 |
| ·单抗腹水的制备 | 第42页 |
| ·单克隆抗体性质的分析 | 第42-43页 |
| ·牛IFN-γ单克隆抗体的应用 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第53页 |
