| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 1 绪论 | 第7-17页 |
| ·目的意义 | 第7-8页 |
| ·植物新基因克隆策略 | 第8-11页 |
| ·基于表达序列标签(EST)的基因克隆 | 第8-9页 |
| ·转座子标签技术 | 第9-10页 |
| ·定位克隆技术 | 第10页 |
| ·mRNA差异表达筛选克隆基因 | 第10-11页 |
| ·DNA芯片技术在基因克隆上的应用 | 第11页 |
| ·非特异性脂质转移蛋白 | 第11-13页 |
| ·非特异性脂质转移蛋白的结构及生化性质 | 第11-13页 |
| ·非特异性脂质转移蛋白的生物学功能 | 第13页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第13-16页 |
| ·实时定量PCR的原理 | 第14页 |
| ·荧光定量PCR反应系统试验设计原则 | 第14-15页 |
| ·实时定量PCR的优点 | 第15页 |
| ·实时定量PCR的应用 | 第15-16页 |
| ·存在的问题及应用前景 | 第16页 |
| ·有关西伯利亚蓼的研究 | 第16-17页 |
| 2 西伯利亚蓼抗病基因的克隆、表达分析 | 第17-35页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·菌株与材料 | 第17页 |
| ·分子生物学及生化试剂 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第17页 |
| ·RNA提取缓冲液的配制 | 第17-18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-35页 |
| ·植物材料西伯利亚蓼的处理 | 第18页 |
| ·从SSH中分析筛选抗病相关基因EST | 第18-19页 |
| ·西伯利亚蓼总RNA的提取 | 第19页 |
| ·5′RACE及3′RACE模板的cDNA合成 | 第19-20页 |
| ·西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白基因的克隆和序列分析 | 第20-23页 |
| ·盐胁迫下PsnsLTPs基因在西伯利亚蓼中的表达特性研究 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR检测 | 第24页 |
| ·实验结果 | 第24-30页 |
| ·西伯利亚蓼不同组织中PsnsLTPs基因的表达特性 | 第30-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·本章小结 | 第34-35页 |
| 3 西伯利亚蓼pROKⅡ/PsnsLTPs植物表达载体构建 | 第35-41页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·分子生物学试剂及生化试剂 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·pMD18-T/PsnsLTPs的引物设计合成 | 第35页 |
| ·pMD18-T/psNSLTPs及pROKⅡ大肠杆菌质粒提取 | 第35-36页 |
| ·获得两端带有XbaⅠ和KpnⅠ酶切位点的PsnsLTPs片段 | 第36页 |
| ·pMD18-T/PsnsLTPs的PCR产物及pROKⅡ酶切反应 | 第36页 |
| ·pROK Ⅱ/PsnsLTPs连接产物检测 | 第36-37页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-39页 |
| ·pROKⅡ/PsnsLTPs植物表达载体质粒的PCR验证 | 第37-38页 |
| ·pROKⅡ/PsnsLTPs重组克隆筛选PCR结果 | 第38页 |
| ·pROKⅡ/PsnsLTPs植物表达载体质粒的酶切验证 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 附录 | 第48-50页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
