| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 主要性状的中英文对照和英文缩写 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 寻找主基因的方法 | 第14-15页 |
| 3 猪肥度性状主效基因研究进展 | 第15-19页 |
| ·猪肥度性状的QTL研究进展 | 第15-16页 |
| ·背膘厚 | 第15-16页 |
| ·腹脂和腹脂率 | 第16页 |
| ·肌内脂肪 | 第16页 |
| ·猪肥度性状候选基因的研究进展 | 第16-19页 |
| ·脂肪酸结合蛋白基因 | 第16-17页 |
| ·肥胖基因 | 第17页 |
| ·黑素皮质素受体4 | 第17-18页 |
| ·胰岛素样生长因子2 | 第18-19页 |
| 4.猪耳状等外貌性状QTL的研究进展 | 第19-21页 |
| ·猪耳状QTL的研究进展 | 第19页 |
| ·猪其它外型性状QTL的研究进展 | 第19-21页 |
| ·猪毛色QTL和候选基因的研究进展 | 第19-20页 |
| ·猪椎骨数QTL的研究进展 | 第20-21页 |
| 5.猪肥度性状-耳状候选基因BMP5和GDF11基因的研究进展 | 第21-24页 |
| ·BMPs(Bone Morphogenetic Protein)家族 | 第21页 |
| ·GDF11(Growth Differentiation Factor 11)基因 | 第21-22页 |
| ·BMP5(Bone Morphogenetic Protein 5)基因 | 第22-24页 |
| 第二章 目的和意义 | 第24-25页 |
| 第三章 材料与方法 | 第25-42页 |
| 1 试验材料 | 第25-28页 |
| ·试验样品 | 第25页 |
| ·DNA样品 | 第25页 |
| ·组织样品 | 第25页 |
| ·主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第26-28页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要溶液 | 第27-28页 |
| 2 试验方法 | 第28-42页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·基因组DNA浓度的测定和质量检测 | 第29页 |
| ·总RNA的提取 | 第29-32页 |
| ·猪总RNA的提取 | 第30页 |
| ·猪总RNA浓度的测定和质量检测 | 第30-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第32页 |
| ·cDNA和基因组扩增引物设计 | 第32页 |
| ·实时定量RT-PCR引物设计 | 第32页 |
| ·候选基因片段的扩增 | 第32-33页 |
| ·cDNA扩增 | 第32-33页 |
| ·基因组扩增 | 第33页 |
| ·候选基因的克隆及序列分析 | 第33-37页 |
| ·PCR产物回收、纯化 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增片段的克隆 | 第34-36页 |
| ·阳性克隆子的鉴定及序列测定 | 第36页 |
| ·序列分析 | 第36-37页 |
| ·候选基因多态性分析 | 第37页 |
| ·数据处理分析 | 第37页 |
| ·统计软件 | 第37页 |
| ·基因效应统计分析模型 | 第37页 |
| ·候选基因组织表达谱分析 | 第37-38页 |
| ·RNA的制备 | 第37-38页 |
| ·半定量RT-PCR反应 | 第38页 |
| ·与候选基因BMP5结合的2个miRNAs表达载体的构建 | 第38-42页 |
| ·寻找与候选基因BMP5有结合位点miRNA | 第38页 |
| ·目的片段的扩增 | 第38页 |
| ·表达载体的构建 | 第38页 |
| ·质粒的抽提及酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·miRNA表达载体转染猪成纤维细胞(瞬时转染) | 第39页 |
| ·细胞总RNA的提取和cDNA的制备 | 第39-41页 |
| ·实时定量PCR检测转染后成纤维细胞miRNA的表达 | 第41页 |
| ·半定量RT-PCR检测转染后成纤维细胞BMP5 mRNA的表达 | 第41-42页 |
| 第四章 结果与分析 | 第42-65页 |
| 1 猪基因组核酸提取及质量检测结果 | 第42-43页 |
| 2 猪GDF11基因 | 第43-48页 |
| ·猪GDF11基因编码区序列克隆及序列分析 | 第43-45页 |
| ·猪GDF11基因cDNA克隆 | 第43-44页 |
| ·猪GDF11基因cDNA序列分析 | 第44-45页 |
| ·猪GDF11基因组织表达谱分析 | 第45页 |
| ·猪GDF11基因结构分析 | 第45-46页 |
| ·猪GDF11基因多态性检测 | 第46-47页 |
| ·猪GDF11基因Hha Ⅰ多态位点与猪肥度性状的关联分析 | 第47-48页 |
| 3 猪BMP5基因 | 第48-65页 |
| ·猪BMP5基因编码区序列克隆及序列分析 | 第48-51页 |
| ·猪BMP5基因cDNA克隆 | 第48-49页 |
| ·猪BMP5基因cDNA序列分析 | 第49-51页 |
| ·猪BMP5基因组织表达谱分析 | 第51页 |
| ·猪BMP5基因部分基因组序列克隆及序列分析 | 第51页 |
| ·猪BMP5基因多态性检测 | 第51-60页 |
| ·猪BMP5基因第1外显子Sac Ⅰ酶切位点多态性的检测结果 | 第52-53页 |
| ·猪BMP5基因第1内含子Hpa Ⅱ酶切位点多态性的检测结果 | 第53-55页 |
| ·猪BMP5基因第3内含子Rsa Ⅰ酶切位点多态性的检测结果 | 第55-56页 |
| ·猪BMP5基因第5内含子Pst Ⅰ酶切位点多态性和EcoR Ⅰ酶切位点多态性的检测结果 | 第56-57页 |
| ·猪BMP5基因3'UTR Rsa Ⅰ酶切位点多态性的检测结果 | 第57-60页 |
| ·猪BMP5基因第三内含子Rsa Ⅰ多态位点与猪肥度性状的关联分析 | 第60页 |
| ·与BMP5结合的2个miRNAs表达载体的构建 | 第60-65页 |
| ·插入片段的PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·miRNA重组质粒的酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·RT-PCR检测转染后miRNA的表达水平 | 第62-63页 |
| ·半定量RT-PCR检测转染后细胞内BMP5 mRNA表达水平 | 第63-65页 |
| 第五章 讨论 | 第65-70页 |
| 1 关于候选基因策略 | 第65-66页 |
| 2 基因序列的获取与分析 | 第66页 |
| 3 候选基因结构与遗传变异分析 | 第66-67页 |
| ·基因组结构的分析 | 第66页 |
| ·候选基因的遗传变异分析 | 第66-67页 |
| 4 候选基因的SNP与性状关联分析 | 第67-68页 |
| ·GDF11基因的SNP与性状关联分析 | 第67页 |
| ·BMP5基因的SNP与性状关联分析 | 第67-68页 |
| ·SNP的应用 | 第68页 |
| 5 组织表达谱分析 | 第68-69页 |
| 6 miRNA载体的超表达分析 | 第69页 |
| 7 下一步工作 | 第69-70页 |
| 小结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附录1:GDF11 cDNA序列 | 第79-80页 |
| 附录2:BMP5 cDNA序列 | 第80页 |
