| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·人甲状旁腺激素 | 第8-10页 |
| ·概述 | 第8页 |
| ·构效关系 | 第8-9页 |
| ·生理作用 | 第9-10页 |
| ·骨质疏松症 | 第10-11页 |
| ·病理特征及危害 | 第10-11页 |
| ·治疗药物 | 第11页 |
| ·hPTH 在骨质疏松症治疗中的应用 | 第11-13页 |
| ·hPTH 重组体 | 第11-12页 |
| ·hPTH 融合蛋白 | 第12-13页 |
| ·hPTH 突变体 | 第13页 |
| ·立题背景及课题内容 | 第13-14页 |
| 第二章 二联体融合蛋白基因的合成及表达载体的构建 | 第14-28页 |
| ·材料 | 第14-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第14-15页 |
| ·工具酶和试剂 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·溶液配制 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-21页 |
| ·hPTH(1-34)_(ab) 基因的合成 | 第16-18页 |
| ·重组质粒pTG19-T-hPTH(1-34)_(ab) 的构建 | 第18页 |
| ·JM109 感受态细胞的制备及转化 | 第18-19页 |
| ·重组子的筛选及鉴定 | 第19页 |
| ·二联体融合蛋白hPTH(1-34)_(ab)-HSA 基因的合成 | 第19-20页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的构建 | 第20-21页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的鉴定 | 第21页 |
| ·结果 | 第21-26页 |
| ·质粒pPIC9K-PTH(1-84)-HSA 的提取及序列测定 | 第21页 |
| ·hPTH(1-34)基因片段的PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·二联体基因的体外拼接 | 第22页 |
| ·重组质粒pTG19-T-hPTH(1-34)_(ab) 的PCR 鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pTG19-T-hPTH(1-34)_(ab) 的序列测定 | 第23页 |
| ·二联体融合蛋白hPTH(1-34)_(ab)-HSA 基因的合成 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的构建 | 第24-25页 |
| ·重组子的双酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的序列测定 | 第26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| 第三章 毕赤酵母工程菌的构建及表达条件初步优化 | 第28-42页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·工具酶和试剂 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·溶液配制 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-34页 |
| ·重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)_(ab)-HSA 的线性化 | 第30页 |
| ·毕赤酵母G5115 感受态的制备及电击转化 | 第30-31页 |
| ·高拷贝重组子的筛选及鉴定 | 第31页 |
| ·高表达毕赤酵母重组子的筛选 | 第31-32页 |
| ·发酵液中二联体融合蛋白的Western blotting 鉴定 | 第32页 |
| ·表达条件的初步优化 | 第32-34页 |
| ·结果 | 第34-41页 |
| ·重组毕赤酵母的构建及高拷贝重组子的筛选 | 第34页 |
| ·重组子的PCR 鉴定 | 第34-35页 |
| ·高表达重组子的筛选 | 第35页 |
| ·二联体融合蛋白的Western blotting 鉴定 | 第35-36页 |
| ·表达条件初步优化 | 第36-41页 |
| ·讨论 | 第41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第四章 融合蛋白纯品制备及活性初步评价 | 第42-49页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·材料与试剂 | 第42-43页 |
| ·溶液的配制 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·目的融合蛋白的分离纯化 | 第43-44页 |
| ·目的融合蛋白的活性评价 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·超滤浓缩发酵上清液 | 第44页 |
| ·浓缩液的亲和层析分离 | 第44-45页 |
| ·洗脱液的透析 | 第45页 |
| ·对RANKL 基因表达的影响 | 第45-46页 |
| ·对OPG 基因表达的影响 | 第46页 |
| ·对IGF-Ⅰ基因表达的影响 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47页 |
| ·小结 | 第47-49页 |
| 结论与展望 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55页 |
