| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-20页 |
| 第一章 引言 | 第20-52页 |
| 1 基因治疗概述 | 第20-22页 |
| 2 高分子基因传递系统 | 第22-28页 |
| ·聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI) | 第22-23页 |
| ·聚赖氨酸(poly(L-lysine),PLL) | 第23-24页 |
| ·Polyamidoamine树形高分子(PAMAM) | 第24-25页 |
| ·聚酯(Poly esters) | 第25-26页 |
| ·侧链可降解的聚合物 | 第26-27页 |
| ·壳聚糖(Chiostan) | 第27-28页 |
| ·其他阳离子高分子 | 第28页 |
| 3 阳离子高分子载体/DNA复合物进行基因传递的障碍及解决方法 | 第28-33页 |
| ·包封 | 第29-30页 |
| ·血清中的稳定性 | 第30页 |
| ·内吞作用 | 第30-31页 |
| ·内涵体逃逸 | 第31-32页 |
| ·细胞核的进入 | 第32-33页 |
| 4 选题思路 | 第33-35页 |
| 参考文献 | 第35-52页 |
| 第二章 聚乙二醇-聚甲基丙烯酸缩水甘油酯侧链接枝多胺作为基因载体 | 第52-72页 |
| 1 前言 | 第52-53页 |
| 2 实验和表征 | 第53-58页 |
| ·原料和试剂 | 第53页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第53-54页 |
| ·聚合物的合成 | 第54页 |
| ·聚乙二醇大分子引发剂的合成(PEG-Br) | 第54页 |
| ·聚乙二醇-聚甲基丙烯酸缩水甘油酯的合成(PEG-PGMA) | 第54页 |
| ·聚乙二醇-聚甲基丙烯酸缩水甘油酯接枝多胺衍生物的合成(PEG-PGMA-oligoamines) | 第54页 |
| ·聚合物的核磁共振氢谱(~1HNMR)表征 | 第54-55页 |
| ·Polycations/DNA复合物的制备 | 第55页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳实验 | 第55页 |
| ·粒径和电势测量 | 第55-56页 |
| ·缓冲能力测量 | 第56页 |
| ·细胞培养 | 第56页 |
| ·体外细胞毒性实验 | 第56-57页 |
| ·体外转染实验 | 第57-58页 |
| ·荧光素酶表达 | 第57页 |
| ·荧光蛋白表达 | 第57页 |
| ·FBS培养基中荧光素酶表达 | 第57-58页 |
| 3 结果与讨论 | 第58-67页 |
| ·聚合物的合成 | 第58-59页 |
| ·聚合物的核磁共振氢谱表征(~1HNMR) | 第59-61页 |
| ·PEG-PGMA-oligoamines缓冲能力的测定 | 第61页 |
| ·PEG-PGMA-oligoamines/DNA复合物的制备和表征 | 第61-64页 |
| ·体外细胞毒性实验 | 第64-65页 |
| ·体外基因转染实验 | 第65-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 第三章 聚甲基丙烯酸缩水甘油酯-接枝-聚丙二醇-接枝-聚甲基丙烯酸缩水甘油酯衍生物的设计合成以及作为基因载体 | 第72-92页 |
| 1 前言 | 第72-73页 |
| 2 实验与表征 | 第73-77页 |
| ·原料和试剂 | 第73-74页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第74页 |
| ·聚合物的合成 | 第74-75页 |
| ·聚丙二醇大分子引发剂的合成(Br-PPO-Br) | 第74页 |
| ·聚甲基丙烯酸缩水甘油酯-聚丙二醇-聚甲基丙烯酸缩水甘油酯(PGMA-PPO-PGMA)的合成 | 第74页 |
| ·聚甲基丙烯酸缩水甘油酯-接枝-聚丙二醇-接枝-聚甲基丙烯酸缩水甘油酯衍生物的合成 | 第74-75页 |
| ·聚合物的表征 | 第75页 |
| ·复合物的制备 | 第75页 |
| ·凝胶电泳实验 | 第75-76页 |
| ·粒径和电势测量 | 第76页 |
| ·细胞培养 | 第76页 |
| ·细胞毒性测量(MTT法) | 第76页 |
| ·体外转染实验 | 第76-77页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第77-88页 |
| ·聚合物的合成 | 第77-79页 |
| ·聚合物的核磁共振氢谱表征(~1HNMR) | 第79-82页 |
| ·聚合物的红外光谱表征 | 第82页 |
| ·凝胶电泳实验 | 第82-83页 |
| ·复合物的粒径和电势测量 | 第83-85页 |
| ·体外细胞毒性实验 | 第85页 |
| ·体外细胞转染实验 | 第85-88页 |
| 4 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 第四章 羟基对聚甲基丙烯酸类基因载体生物性能的影响 | 第92-111页 |
| 1 前言 | 第92-93页 |
| 2 实验和表征 | 第93-97页 |
| ·原料和试剂 | 第93页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第93页 |
| ·聚合物的合成 | 第93-94页 |
| ·聚甲基丙烯酸缩水甘油酯的合成(PGMA) | 第93-94页 |
| ·PAHPMA的合成 | 第94页 |
| ·PAEAHPMA的合成 | 第94页 |
| ·PAEMA和PAEAEMA的合成 | 第94页 |
| ·聚合物的表征 | 第94-95页 |
| ·Polycations/DNA复合物的制备 | 第95页 |
| ·凝胶电泳实验 | 第95页 |
| ·肝素置换实验 | 第95页 |
| ·粒径和电势的测量 | 第95页 |
| ·细胞培养 | 第95-96页 |
| ·细胞毒性试验 | 第96页 |
| ·荧光素酶转染实验 | 第96-97页 |
| 3 结果与讨论 | 第97-106页 |
| ·聚合物的合成和表征 | 第97-100页 |
| ·凝胶电泳实验 | 第100页 |
| ·肝素置换实验 | 第100-103页 |
| ·电势和粒径的测定 | 第103-104页 |
| ·细胞毒性测量 | 第104页 |
| ·体外转染实验 | 第104-106页 |
| 4 结论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-111页 |
| 第五章 聚乙二醇-聚己内酯-聚胺乙基甲基丙烯酸酯自组装成胶束作为基因载体的应用 | 第111-131页 |
| 1 前言 | 第111-112页 |
| 2 实验与表征 | 第112-116页 |
| ·原料和试剂 | 第112页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第112-113页 |
| ·聚合物的合成 | 第113页 |
| ·PEG-PCL-Br,PEG-Br和Chol-PCL-Br大分子引发剂的合成 | 第113页 |
| ·PEG-PCL-P(Boc-AEMA)s,PEG-P(Boc-AEMA),PCL-P(Boc-AEMA)的合成 | 第113页 |
| ·PEG-PCL-PAEMAs,PEG-PAEMA和PCL-PAEMA的合成 | 第113页 |
| ·聚合物的结构表征 | 第113-114页 |
| ·聚合物与DNA复合物的制备 | 第114页 |
| ·凝胶电泳实验 | 第114页 |
| ·粒径和电势的测量 | 第114页 |
| ·细胞培养 | 第114-115页 |
| ·细胞毒性实验 | 第115页 |
| ·非血清条件下的基因转染实验 | 第115-116页 |
| ·血清条件下的基因转染实验 | 第116页 |
| ·蛋白吸附实验 | 第116页 |
| 3 结果与讨论 | 第116-127页 |
| ·聚合物的设计与合成 | 第116-119页 |
| ·聚合物胶束的表征 | 第119-120页 |
| ·复合物的粒径和电势 | 第120-122页 |
| ·凝胶电泳实验 | 第122-123页 |
| ·细胞毒性实验 | 第123-124页 |
| ·体外转染实验 | 第124-126页 |
| ·蛋白吸附实验 | 第126-127页 |
| 4 结论 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-131页 |
| 第六章 运载DNA和阿霉素的靶向多功能载体的构建 | 第131-150页 |
| 1 前言 | 第131-132页 |
| 2 实验和表征 | 第132-136页 |
| ·原料和试剂 | 第132页 |
| ·聚合物的合成 | 第132-133页 |
| ·PASP-DOX的合成 | 第132-133页 |
| ·Biotin-PEG-PGLA的合成 | 第133页 |
| ·聚合物的表征 | 第133页 |
| ·多功能载体的制备和表征(TAB/PICs-D/pDNA) | 第133-134页 |
| ·聚离子复合物胶束的制备(PICs/PICs-D) | 第133-134页 |
| ·亲和素/生物素-聚乙二醇-聚谷氨酸的制备(AB) | 第134页 |
| ·PICs-D/DNA复合物的制备 | 第134页 |
| ·TAB/PICs-D/DNA多功能载体的制备 | 第134页 |
| ·粒径和电势的测量 | 第134页 |
| ·凝胶电泳实验 | 第134-135页 |
| ·细胞培养 | 第135页 |
| ·细胞毒性实验 | 第135页 |
| ·体外荧光素酶转染实验 | 第135-136页 |
| ·荧光蛋白和阿霉素的表达 | 第136页 |
| 3 结果与讨论 | 第136-148页 |
| ·PICs和TAB/PICs-D/DNA多功能载体的构建 | 第136-137页 |
| ·PICs的表征 | 第137-139页 |
| ·PICs和PICs-D的细胞毒性实验 | 第139-141页 |
| ·PICs和PICs-D的荧光素酶转染实验 | 第141-143页 |
| ·TAB/PICs/DNA多功能载体的表征 | 第143-144页 |
| ·TAB/PICs/DNA多功能载体的细胞毒性实验 | 第144-146页 |
| ·TAB/PICs/DNA多功能载体的荧光素酶转染实验 | 第146-147页 |
| ·DOX和pEGFP在HepG2细胞中的表达 | 第147-148页 |
| 4 结论 | 第148-150页 |
| 参考文献 | 第150-154页 |
| 致谢 | 第154-156页 |
| 附录 | 第156-157页 |
