| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 1 实验方案设计 | 第14-17页 |
| 1.1 实验的目的及意义 | 第14页 |
| 1.2 研究内容 | 第14页 |
| 1.3 技术路线图 | 第14页 |
| 1.4 实验方案 | 第14-17页 |
| 1.4.1 肺癌相关lnc RNA的筛选和验证 | 第14-15页 |
| 1.4.2 细胞株的培养 | 第15页 |
| 1.4.3 细胞总RNA提取、逆转录PCR及RT-q PCR | 第15页 |
| 1.4.4 细胞总蛋白提取及检测 | 第15页 |
| 1.4.5 DPP10-AS1对肺癌细胞生长和增殖的作用 | 第15页 |
| 1.4.6 DPP10-AS1对肺癌细胞生长周期及细胞凋亡的作用 | 第15-16页 |
| 1.4.7 甲基化表观遗传对DPP10-AS1和DPP10 m RNA的影响 | 第16页 |
| 1.4.8 RNase酶保护试验检测DPP10-AS1和DPP10 m RNA能否形成杂化双链 | 第16页 |
| 1.4.9 核质分离试验检测DPP10-AS1在细胞核、质的定位 | 第16页 |
| 1.4.10 肺癌组织样本和肺癌细胞中DPP10-AS1和DPP10 m RNA的表达分析 | 第16页 |
| 1.4.11 数据总结分析 | 第16-17页 |
| 2.实验材料与方法 | 第17-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-25页 |
| 2.1.1 主要实验仪器 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂耗材 | 第17-20页 |
| 2.1.3 实验细胞株、菌株及载体 | 第20页 |
| 2.1.4 肺癌患者组织样本的收集 | 第20页 |
| 2.1.5 主要试剂及配制 | 第20-25页 |
| 2.1.5.1 1×PBS | 第20-21页 |
| 2.1.5.2 RPMI-1640 培养基 | 第21页 |
| 2.1.5.3 5×SDS上样缓冲液 | 第21页 |
| 2.1.5.4 1 mol/L Tris-HCl (PH=6.8) | 第21页 |
| 2.1.5.5 5×电泳缓冲液 | 第21页 |
| 2.1.5.6 1.5 mol/L Tris.HCl (PH=8.8) | 第21-22页 |
| 2.1.5.6 5×转膜缓冲液 | 第22页 |
| 2.1.5.8 5×TBS缓冲液 | 第22页 |
| 2.1.5.9 1×TBST缓冲液 | 第22页 |
| 2.1.5.10 10 % AP | 第22页 |
| 2.1.5.11 30 % Acr : Bis | 第22-23页 |
| 2.1.5.12 10 % SDS | 第23页 |
| 2.1.5.13 2 ml 5 % 浓缩胶 | 第23页 |
| 2.1.5.14 8 %分离胶 | 第23页 |
| 2.1.5.15 0.25 %胰酶 | 第23页 |
| 2.1.5.16 100 mg/ml氨苄青霉素 | 第23-24页 |
| 2.1.5.17 1.7 %琼脂糖凝胶 | 第24页 |
| 2.1.5.18 LB液体培养基 | 第24页 |
| 2.1.5.19 5 mg/ml MTT | 第24页 |
| 2.1.5.20 LB固体培养基 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-37页 |
| 2.2.1 细胞计数 | 第25页 |
| 2.2.2 细胞培养和传代 | 第25页 |
| 2.2.3 细胞冻存 | 第25页 |
| 2.2.4 细胞复苏 | 第25页 |
| 2.2.5 合成RNAs | 第25页 |
| 2.2.6 细胞转染 | 第25-26页 |
| 2.2.7 总RNA提取 | 第26页 |
| 2.2.8 组织中总RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.9 RNA纯度分析 | 第27页 |
| 2.2.10 逆转录反应 | 第27-28页 |
| 2.2.11 普通PCR | 第28-29页 |
| 2.2.12 RT-q PCR | 第29-30页 |
| 2.2.13 重组质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.14 感受态细胞的制备、转化、涂布及质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.15 无内毒素质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.16 MTT分析细胞生长情况 | 第31-32页 |
| 2.2.17 细胞克隆形成实验 | 第32页 |
| 2.2.18 细胞周期检测 | 第32-33页 |
| 2.2.19 细胞凋亡检测 | 第33页 |
| 2.2.20 Western blot检测蛋白表达 | 第33-35页 |
| 2.2.20.1 提取总蛋白 | 第33页 |
| 2.2.20.2 蛋白样品的处理 | 第33页 |
| 2.2.20.3 制定蛋白标准曲线及蛋白浓度的测定： | 第33-34页 |
| 2.2.20.4 SDS-PAGE制备、蛋白定量及电泳跑胶 | 第34页 |
| 2.2.20.5 转膜 | 第34页 |
| 2.2.20.6 封闭 | 第34-35页 |
| 2.2.20.7 抗体的孵育及扫膜 | 第35页 |
| 2.2.21 核质分离试验 | 第35页 |
| 2.2.22 RNA酶保护试验 | 第35-36页 |
| 2.2.23 甲基化抑制剂 5-氮胞苷（5-Azacytidine）试验 | 第36页 |
| 2.2.24 数据的统计分析 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-66页 |
| 3.1 肺癌相关的lnc RNA表达分析 | 第37-40页 |
| 3.2 DPP10-AS1在肺癌组织中表达上调且和病人的预后不良有关 | 第40-43页 |
| 3.3 构建获得过表达DPP10-AS1和DPP10的重组质粒 | 第43-44页 |
| 3.4 siRNA抑制DPP10-AS1和DPP10 m RNA表达，过表达质粒提高DPP10 m RNA和蛋白表达 | 第44-46页 |
| 3.5 DPP10-AS1促进肺癌细胞增殖和生长 | 第46-48页 |
| 3.6 DPP10-AS1促进细胞周期进程和抑制调亡 | 第48-51页 |
| 3.6.1 DPP10-AS1促进肺癌细胞的周期进程 | 第48-50页 |
| 3.6.2 DPP10-AS1在肺癌细胞中抑制细胞凋亡 | 第50-51页 |
| 3.7 DPP10-AS1与DPP10 m RNA在肺癌组织和肺癌细胞中协同表达 | 第51-53页 |
| 3.8 DPP10 m RNA的表达受DPP10-AS1的正调控 | 第53-56页 |
| 3.8.1 DPP10-AS1促进DPP10 m RNA和蛋白表达 | 第53-55页 |
| 3.8.2 DPP10 m RNA不影响DPP10-AS1表达 | 第55-56页 |
| 3.9 DPP10-AS1通过促进DPP10 m RNA表达影响肺癌细胞增殖和生长 | 第56-58页 |
| 3.10 DPP10-AS1通过促进DPP10 m RNA表达促进细胞周期和抑制调亡 | 第58-62页 |
| 3.10.1 DPP10-AS1通过促进DPP10 m RNA表达促进细胞周期进程 | 第58-60页 |
| 3.10.2 DPP10-AS1通过促进DPP10 m RNA表达抑制细胞凋亡 | 第60-62页 |
| 3.11 DPP10-AS1位于细胞核内，且未与DPP10 m RNA形成杂化双链以提高稳定性。 | 第62-63页 |
| 3.12 DPP10-AS1和DPP10 m RNA受甲基化表观遗传调控 | 第63-66页 |
| 4 结论 | 第66-67页 |
| 5 讨论 | 第67-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 附录A 缩写表 | 第74-76页 |
| 附录B 综述 | 第76-85页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 在学研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87-89页 |
