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长链非编码RNA DPP10-AS1在肺癌发生中的作用

摘要第3-6页
Abstract第6-8页
引言第12-14页
1 实验方案设计第14-17页
    1.1 实验的目的及意义第14页
    1.2 研究内容第14页
    1.3 技术路线图第14页
    1.4 实验方案第14-17页
        1.4.1 肺癌相关lnc RNA的筛选和验证第14-15页
        1.4.2 细胞株的培养第15页
        1.4.3 细胞总RNA提取、逆转录PCR及RT-q PCR第15页
        1.4.4 细胞总蛋白提取及检测第15页
        1.4.5 DPP10-AS1对肺癌细胞生长和增殖的作用第15页
        1.4.6 DPP10-AS1对肺癌细胞生长周期及细胞凋亡的作用第15-16页
        1.4.7 甲基化表观遗传对DPP10-AS1和DPP10 m RNA的影响第16页
        1.4.8 RNase酶保护试验检测DPP10-AS1和DPP10 m RNA能否形成杂化双链第16页
        1.4.9 核质分离试验检测DPP10-AS1在细胞核、质的定位第16页
        1.4.10 肺癌组织样本和肺癌细胞中DPP10-AS1和DPP10 m RNA的表达分析第16页
        1.4.11 数据总结分析第16-17页
2.实验材料与方法第17-37页
    2.1 实验材料第17-25页
        2.1.1 主要实验仪器第17页
        2.1.2 主要试剂耗材第17-20页
        2.1.3 实验细胞株、菌株及载体第20页
        2.1.4 肺癌患者组织样本的收集第20页
        2.1.5 主要试剂及配制第20-25页
            2.1.5.1 1×PBS第20-21页
            2.1.5.2 RPMI-1640 培养基第21页
            2.1.5.3 5×SDS上样缓冲液第21页
            2.1.5.4 1 mol/L Tris-HCl (PH=6.8)第21页
            2.1.5.5 5×电泳缓冲液第21页
            2.1.5.6 1.5 mol/L Tris.HCl (PH=8.8)第21-22页
            2.1.5.6 5×转膜缓冲液第22页
            2.1.5.8 5×TBS缓冲液第22页
            2.1.5.9 1×TBST缓冲液第22页
            2.1.5.10 10 % AP第22页
            2.1.5.11 30 % Acr : Bis第22-23页
            2.1.5.12 10 % SDS第23页
            2.1.5.13 2 ml 5 % 浓缩胶第23页
            2.1.5.14 8 %分离胶第23页
            2.1.5.15 0.25 %胰酶第23页
            2.1.5.16 100 mg/ml氨苄青霉素第23-24页
            2.1.5.17 1.7 %琼脂糖凝胶第24页
            2.1.5.18 LB液体培养基第24页
            2.1.5.19 5 mg/ml MTT第24页
            2.1.5.20 LB固体培养基第24-25页
    2.2 实验方法第25-37页
        2.2.1 细胞计数第25页
        2.2.2 细胞培养和传代第25页
        2.2.3 细胞冻存第25页
        2.2.4 细胞复苏第25页
        2.2.5 合成RNAs第25页
        2.2.6 细胞转染第25-26页
        2.2.7 总RNA提取第26页
        2.2.8 组织中总RNA提取第26-27页
        2.2.9 RNA纯度分析第27页
        2.2.10 逆转录反应第27-28页
        2.2.11 普通PCR第28-29页
        2.2.12 RT-q PCR第29-30页
        2.2.13 重组质粒的构建第30-31页
        2.2.14 感受态细胞的制备、转化、涂布及质粒提取第31页
        2.2.15 无内毒素质粒提取第31页
        2.2.16 MTT分析细胞生长情况第31-32页
        2.2.17 细胞克隆形成实验第32页
        2.2.18 细胞周期检测第32-33页
        2.2.19 细胞凋亡检测第33页
        2.2.20 Western blot检测蛋白表达第33-35页
            2.2.20.1 提取总蛋白第33页
            2.2.20.2 蛋白样品的处理第33页
            2.2.20.3 制定蛋白标准曲线及蛋白浓度的测定:第33-34页
            2.2.20.4 SDS-PAGE制备、蛋白定量及电泳跑胶第34页
            2.2.20.5 转膜第34页
            2.2.20.6 封闭第34-35页
            2.2.20.7 抗体的孵育及扫膜第35页
        2.2.21 核质分离试验第35页
        2.2.22 RNA酶保护试验第35-36页
        2.2.23 甲基化抑制剂 5-氮胞苷(5-Azacytidine)试验第36页
        2.2.24 数据的统计分析第36-37页
3 实验结果第37-66页
    3.1 肺癌相关的lnc RNA表达分析第37-40页
    3.2 DPP10-AS1在肺癌组织中表达上调且和病人的预后不良有关第40-43页
    3.3 构建获得过表达DPP10-AS1和DPP10的重组质粒第43-44页
    3.4 siRNA抑制DPP10-AS1和DPP10 m RNA表达,过表达质粒提高DPP10 m RNA和蛋白表达第44-46页
    3.5 DPP10-AS1促进肺癌细胞增殖和生长第46-48页
    3.6 DPP10-AS1促进细胞周期进程和抑制调亡第48-51页
        3.6.1 DPP10-AS1促进肺癌细胞的周期进程第48-50页
        3.6.2 DPP10-AS1在肺癌细胞中抑制细胞凋亡第50-51页
    3.7 DPP10-AS1与DPP10 m RNA在肺癌组织和肺癌细胞中协同表达第51-53页
    3.8 DPP10 m RNA的表达受DPP10-AS1的正调控第53-56页
        3.8.1 DPP10-AS1促进DPP10 m RNA和蛋白表达第53-55页
        3.8.2 DPP10 m RNA不影响DPP10-AS1表达第55-56页
    3.9 DPP10-AS1通过促进DPP10 m RNA表达影响肺癌细胞增殖和生长第56-58页
    3.10 DPP10-AS1通过促进DPP10 m RNA表达促进细胞周期和抑制调亡第58-62页
        3.10.1 DPP10-AS1通过促进DPP10 m RNA表达促进细胞周期进程第58-60页
        3.10.2 DPP10-AS1通过促进DPP10 m RNA表达抑制细胞凋亡第60-62页
    3.11 DPP10-AS1位于细胞核内,且未与DPP10 m RNA形成杂化双链以提高稳定性。第62-63页
    3.12 DPP10-AS1和DPP10 m RNA受甲基化表观遗传调控第63-66页
4 结论第66-67页
5 讨论第67-70页
参考文献第70-74页
附录A 缩写表第74-76页
附录B 综述第76-85页
    参考文献第81-85页
在学研究成果第85-86页
致谢第86-87页
附件第87-89页

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