| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 研究背景 | 第12页 |
| 1.2 普瑞巴林 | 第12-14页 |
| 1.2.1 普瑞巴林简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 普瑞巴林的合成途径 | 第13-14页 |
| 1.3 脂肪酶 | 第14-16页 |
| 1.3.1 脂肪酶的来源 | 第15页 |
| 1.3.2 脂肪酶的结构和性质 | 第15页 |
| 1.3.3 脂肪酶的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.4 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在手性化合物制备中的应用 | 第16页 |
| 1.4 外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第16-21页 |
| 1.4.1 表达载体的影响 | 第16-17页 |
| 1.4.2 目的基因序列对表达的影响 | 第17页 |
| 1.4.3 表达策略的影响 | 第17页 |
| 1.4.4 培养条件的影响 | 第17-19页 |
| 1.4.5 重组大肠杆菌的高密度发酵技术 | 第19-21页 |
| 1.5 本论文的选题意义及研究内容 | 第21-22页 |
| 1.5.1 本论文的选题意义 | 第21-22页 |
| 1.5.2 本论文的研究内容 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-28页 |
| 第二章 5L发酵罐分批发酵工艺优化 | 第28-44页 |
| 2.1 前言 | 第28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 菌种与培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.2 仪器设备(见附录Ⅰ) | 第29页 |
| 2.2.3 发酵工艺 | 第29-30页 |
| 2.2.4 分批发酵结果分析方法 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-42页 |
| 2.3.1 菌体OD_(600)值与干重的关系 | 第31-32页 |
| 2.3.2 种子对工程菌生长及其产脂肪酶的影响 | 第32-35页 |
| 2.3.3 诱导剂对工程菌生长及其产脂肪酶的影响 | 第35-38页 |
| 2.3.4 溶氧对工程菌生长及其产脂肪酶的影响 | 第38-41页 |
| 2.3.5 重复试验 | 第41-42页 |
| 2.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| 第三章 5L发酵罐分批补料发酵工艺的研究 | 第44-59页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 材料 | 第44-45页 |
| 3.2.2 方法 | 第45-47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-57页 |
| 3.3.1 OD标准曲线(见第二章) | 第47页 |
| 3.3.2 葡萄糖标准曲线 | 第47页 |
| 3.3.3 不同补料培养基对Ecoli BL21/pET28b-TLL生长和脂肪酶表达的影响 | 第47-49页 |
| 3.3.4 补料控制工艺的选择 | 第49-51页 |
| 3.3.5 诱导时机对工程菌生长和脂肪酶表达的影响 | 第51-53页 |
| 3.3.6 诱导剂浓度对工程菌生长和脂肪酶表达的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.7 乳糖加入方式对工程菌生长和脂肪酶表达的影响 | 第54-56页 |
| 3.3.8 验证实验 | 第56-57页 |
| 3.4 本章小结 | 第57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 第四章 重组脂肪酶催化转化普瑞巴林关键手性中间体工艺条件的优化 | 第59-73页 |
| 4.1 前言 | 第59页 |
| 4.2 材料与方法 | 第59-62页 |
| 4.2.1 菌种与培养基 | 第59-60页 |
| 4.2.2 静息细胞的制备 | 第60页 |
| 4.2.3 静息细胞的转化 | 第60-62页 |
| 4.2.4 分析方法 | 第62页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第62-71页 |
| 4.3.1 温度对细胞转化的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.2 pH对静息细胞转化的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.3 金属盐离子对静息细胞转化的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.4 乙酸钙浓度对细胞转化的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.5 底物浓度对细胞转化的影响 | 第66-67页 |
| 4.3.6 不同投料方式对转化的影响 | 第67-68页 |
| 4.3.7 不同细胞浓度对转化的影响 | 第68-69页 |
| 4.3.8 补料方式的优化 | 第69-70页 |
| 4.3.9 放大到2L反应体系实验 | 第70-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-73页 |
| 第五章 生产工艺设计和物料衡算 | 第73-86页 |
| 5.1 普瑞巴林关键手性中间体生产工艺设计 | 第73-76页 |
| 5.1.1 普瑞巴林关键手性中间体生产工艺流程图 | 第73-74页 |
| 5.1.2 带控制点的生产工艺流程图(见附录Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ ) | 第74页 |
| 5.1.3 普瑞巴林关键手性中间体的生产工艺 | 第74-76页 |
| 5.2 物料衡算 | 第76-84页 |
| 5.2.1 生产能力、设备数量和容积的确定 | 第76-79页 |
| 5.2.2 发酵工段物料衡算 | 第79-84页 |
| 5.3 本章小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-86页 |
| 第六章 结论与展望 | 第86-88页 |
| 6.1 结论 | 第86-87页 |
| 6.2 展望 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附录 | 第89-94页 |
