| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第22-45页 |
| 1.1 谷氨酸氧化酶 | 第22-29页 |
| 1.1.1 L-谷氨酸氧化酶的发现 | 第22页 |
| 1.1.2 L-谷氨酸氧化酶催化反应 | 第22页 |
| 1.1.3 L-谷氨酸氧化酶的应用 | 第22-25页 |
| 1.1.4 L-谷氨酸氧化酶的来源 | 第25-27页 |
| 1.1.5 L-谷氨酸氧化酶的发酵和分离纯化 | 第27-29页 |
| 1.2 α-酮戊二酸 | 第29-32页 |
| 1.2.1 α-酮戊二酸的分子结构 | 第29页 |
| 1.2.2 α-酮戊二酸的发现 | 第29-30页 |
| 1.2.3 α-酮戊二酸的应用 | 第30-32页 |
| 1.3 L-氨基酸氧化酶 | 第32-35页 |
| 1.3.1 L-氨基酸氧化酶 | 第32页 |
| 1.3.2 L-氨基酸氧化酶的功能 | 第32-34页 |
| 1.3.3 L-氨基酸氧化酶的异源表达 | 第34-35页 |
| 1.4 异源蛋白表达策略 | 第35-39页 |
| 1.4.1 表达系统的选择 | 第35页 |
| 1.4.2 大肠杆菌表达系统 | 第35-36页 |
| 1.4.3 哺乳动物细胞表达系统 | 第36-37页 |
| 1.4.4 酵母表达系统 | 第37-39页 |
| 1.5 高密度发酵 | 第39-41页 |
| 1.5.1 高密度发酵的定义 | 第39-40页 |
| 1.5.2 大肠杆菌的高密度发酵 | 第40页 |
| 1.5.3 毕赤酵母的高密度发酵 | 第40-41页 |
| 1.6 固定化研究 | 第41-43页 |
| 1.6.1 酶的固定化 | 第41-42页 |
| 1.6.2 细胞固定化 | 第42-43页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第43-45页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第43-44页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第44-45页 |
| 第二章 L-谷氨酸氧化酶在大肠杆菌和毕赤酵母中的异源表达及其应用研究 | 第45-84页 |
| 2.1 前言 | 第45-46页 |
| 2.2 材料和方法 | 第46-65页 |
| 2.2.1 载体和菌种 | 第46-47页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第47页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第47页 |
| 2.2.4 培养基 | 第47-48页 |
| 2.2.5 溶液及缓冲液 | 第48-50页 |
| 2.2.6 实验方法 | 第50-65页 |
| 2.3 实验结果 | 第65-82页 |
| 2.3.1 重组L-谷氨酸氧化酶在大肠杆菌中的表达及其酶学性质研究 | 第65-70页 |
| 2.3.2 重组L-谷氨酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究 | 第70-80页 |
| 2.3.3 毕赤酵母重组L-谷氨酸氧化酶糖基化验证 | 第80-81页 |
| 2.3.4 重组L-谷氨酸氧化酶转化条件的研究 | 第81页 |
| 2.3.5 α-酮戊二酸的结晶脱盐 | 第81-82页 |
| 2.4 讨论 | 第82-84页 |
| 第三章 L-氨基酸氧化酶在大肠杆菌中的异源表达及其应用研究 | 第84-102页 |
| 3.1 前言 | 第84-86页 |
| 3.2 材料与方法 | 第86-92页 |
| 3.2.1 载体和菌种 | 第86-87页 |
| 3.2.2 设备耗材 | 第87页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第87-92页 |
| 3.3 结果分析 | 第92-100页 |
| 3.3.1 荧光标签对kc-LAAO的促可溶研究 | 第92-94页 |
| 3.3.2 异源表达的kc-LAAO的酶学性质分析 | 第94-100页 |
| 3.4. 讨论 | 第100-102页 |
| 第四章 L-氨基酸氧化酶的在毕赤酵母中的异源表达及其应用研究 | 第102-121页 |
| 4.1 前言 | 第102-103页 |
| 4.2 材料与方法 | 第103-110页 |
| 4.2.1 载体 | 第103-104页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第104页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第104页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第104-110页 |
| 4.3 结果分析 | 第110-119页 |
| 4.3.1 重组pHBM905BDM-kc-laao的构建 | 第110-111页 |
| 4.3.2 kc-LAAO的基因剂量效益的研究 | 第111-112页 |
| 4.3.3 酵母工程菌的高密度发酵 | 第112-113页 |
| 4.3.4 kc-LAAO的酶活表征 | 第113-117页 |
| 4.3.5 α-酮戊二酸转化反应条件研究 | 第117-118页 |
| 4.3.6 L-谷氨酸氧化酶糖基化验证 | 第118-119页 |
| 4.4 讨论 | 第119-121页 |
| 第五章 L-谷氨酸氧化酶的表面展示以及产酶菌的细胞固定化研究 | 第121-141页 |
| 5.1 前言 | 第121-123页 |
| 5.2 材料和方法 | 第123-129页 |
| 5.2.1 本章节所用质粒和菌种 | 第123-124页 |
| 5.2.2 本章节所用试剂 | 第124页 |
| 5.2.3 本章节所用的仪器设备 | 第124-125页 |
| 5.2.4 实验方法 | 第125-129页 |
| 5.3 结果与分析 | 第129-139页 |
| 5.3.1 pHBM905BDM-lgox-HA-SED1的表达载体的构建 | 第129-130页 |
| 5.3.2 western印记鉴定LGOX在细胞壁上的锚定 | 第130-131页 |
| 5.3.3 流式细胞仪分析含有LGOX-HA-SED1的毕赤酵母细胞 | 第131-132页 |
| 5.3.4 诱导时间对L-谷氨酸氧化酶表面展示效率的影响 | 第132-133页 |
| 5.3.5 激光共聚焦显微镜下观察LGOX-HA-SED1的表面展示 | 第133-134页 |
| 5.3.6 含BL21(DE3)/pET-23a-lgox的大肠杆菌全细胞和固定化细胞酶学性质分析 | 第134-135页 |
| 5.3.7 含BL21(DE3)/pET-23a-mCherry-kc-laao的大肠杆菌的全细胞和固定化细胞酶学性质分析 | 第135-136页 |
| 5.3.8 含GS115/pHBM905BDM-SED1-HA-lgox的毕赤酵母的全细胞和固定化细胞酶学性质分析 | 第136-137页 |
| 5.3.9 固定化细胞使用频次分析 | 第137-139页 |
| 5.4 讨论 | 第139-141页 |
| 第六章 固定化细胞技术测定酱油中L-谷氨酸钠含量的研究 | 第141-149页 |
| 6.1 前言 | 第141-142页 |
| 6.2 材料与方法 | 第142-144页 |
| 6.2.1 主要材料仪器 | 第142页 |
| 6.2.2 氧化酶酶膜制备方法 | 第142页 |
| 6.2.3 标准曲线制备 | 第142-143页 |
| 6.2.4 反应原理 | 第143-144页 |
| 6.2.5 测定方法 | 第144页 |
| 6.3 结果分析 | 第144-148页 |
| 6.3.1 用固定化表达L-谷氨酸氧化酶的细胞的酶膜测定某特级美味鲜调味酱油中的谷氨酸钠的响应值 | 第144-145页 |
| 6.3.2 用固定化表达L-氨基酸氧化酶的细胞的酶膜测定测定某特级美味鲜调味酱油中的谷氨酸钠的响应值 | 第145页 |
| 6.3.3 用固定化表达L-谷氨酸氧化酶的细胞的酶膜测定某品牌一级草菇老抽中的谷氨酸钠含量的响应值 | 第145-146页 |
| 6.3.4 用固定化表达L-氨基酸氧化酶的细胞的酶膜测定某品牌一级草菇老抽中的谷氨酸钠含量的响应值 | 第146页 |
| 6.3.5 用固定化表达L-谷氨酸氧化酶的细胞的酶膜测定某品牌三级精选生抽中的谷氨酸钠的响应值 | 第146-147页 |
| 6.3.6 用固定化表达L-氨基酸氧化酶的细胞的酶膜测定某品牌三级精选生抽中的谷氨酸钠的响应值 | 第147-148页 |
| 6.4 讨论 | 第148-149页 |
| 结论与展望 | 第149-154页 |
| 7.1 结论 | 第149-151页 |
| 7.2 展望 | 第151-154页 |
| 参考文献 | 第154-169页 |
| 附录 | 第169-171页 |
| 致谢 | 第171-172页 |
