| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第1章 数字PCR技术及其在遗传性耳聋检测中的应用研究 | 第14-46页 |
| 1.1 dPCR技术发展历程及技术优势 | 第14-16页 |
| 1.2 几种常见dPCR技术平台 | 第16-18页 |
| 1.2.1 基于微液滴分液技术的dPCR平台 | 第16-17页 |
| 1.2.2 基于微流控芯片分液技术的dPCR平台 | 第17-18页 |
| 1.2.3 基于微孔分液技术的dPCR平台 | 第18页 |
| 1.2.4 基于印刷分液技术的dPCR平台 | 第18页 |
| 1.3 dPCR技术应用现状 | 第18-23页 |
| 1.3.1 拷贝数变异检测的应用 | 第19页 |
| 1.3.2 肿瘤标记物早期检测的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 常见遗传病产前诊断的应用 | 第20-22页 |
| 1.3.4 转基因食品检测的应用 | 第22页 |
| 1.3.5 病原微生物检测的应用 | 第22-23页 |
| 1.3.6 新一代测序技术的应用 | 第23页 |
| 1.4 遗传性耳聋及常见致病基因 | 第23-26页 |
| 1.4.1 GJB2基因 | 第24页 |
| 1.4.2 SLC26A4基因 | 第24-25页 |
| 1.4.3 I2SrRNA基因 | 第25-26页 |
| 1.5 常见耳聋检测样本 | 第26-27页 |
| 1.5.1 外周血 | 第26页 |
| 1.5.2 干血斑 | 第26-27页 |
| 1.5.3 口腔拭子 | 第27页 |
| 1.5.4 唾液 | 第27页 |
| 1.6 耳聋常规检测技术及应用现状 | 第27-31页 |
| 1.6.1 耳聋热点突变位点筛查方法及应用现状 | 第28页 |
| 1.6.2 药物性耳聋突变异质率定量检测方法及应用现状 | 第28-30页 |
| 1.6.3 无创产前诊断方法及应用现状 | 第30-31页 |
| 总结 | 第31-33页 |
| 参考文献 | 第33-46页 |
| 第2章 基于微液滴数字PCR以口腔拭子为检材的耳聋无创检测方法的建立与验证 | 第46-87页 |
| 2.1 前言 | 第46页 |
| 2.2 材料 | 第46-49页 |
| 2.2.1 检测样本 | 第46-47页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第48页 |
| 2.2.4 生物信息数据库及辅助分析软件 | 第48-49页 |
| 2.3 方法 | 第49-60页 |
| 2.3.1 口腔拭子采集、基因组DNA提取、定量及保存 | 第49-50页 |
| 2.3.2 干血斑样本处理、基因组DNA提取、定量及保存 | 第50-52页 |
| 2.3.3 质粒制备、DNA提取、定量及保存 | 第52-56页 |
| 2.3.4 引物和探针设计 | 第56-58页 |
| 2.3.5 微液滴数字PCR (ddPCR)工作流程 | 第58-59页 |
| 2.3.6 特异性验证 | 第59页 |
| 2.3.7 动态检测限、最低检测限及重复性检测 | 第59页 |
| 2.3.8 干血斑样本检测 | 第59-60页 |
| 2.3.9 口腔拭子效期验证 | 第60页 |
| 2.3.10 口腔拭子样本检测 | 第60页 |
| 2.4 结果 | 第60-82页 |
| 2.4.1 实验流程设计 | 第60-62页 |
| 2.4.2 特异性检测结果 | 第62-64页 |
| 2.4.3 动态检测限、最低检测限及重复性结果 | 第64-68页 |
| 2.4.4 干血斑定量检测及分型结果 | 第68-73页 |
| 2.4.5 口腔拭子效期验证结果 | 第73-75页 |
| 2.4.6 临床口腔拭子样本定量检测及分型结果 | 第75-82页 |
| 2.5 小结 | 第82-83页 |
| 2.6 讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 第3章 基于微液滴数字PCR的药物性耳聋基因突变异质率定量检测 | 第87-107页 |
| 3.1 前言 | 第87页 |
| 3.2 材料 | 第87-89页 |
| 3.2.1 检测样本 | 第87-88页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第88-89页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第89页 |
| 3.2.4 生物信息数据库及辅助分析软件 | 第89页 |
| 3.3 方法 | 第89-93页 |
| 3.3.1 口腔拭子采集、基因组DNA提取、定量及保存 | 第89-90页 |
| 3.3.2 干血斑样本处理、基因组DNA提取、定量及保存 | 第90页 |
| 3.3.3 质粒制备、DNA提取、定量及保存 | 第90页 |
| 3.3.4 引物和探针设计 | 第90-91页 |
| 3.3.5 微液滴数字PCR (ddPCR)工作流程 | 第91页 |
| 3.3.6 不同突变负荷标准品检测 | 第91-92页 |
| 3.3.7 散发干血样本检测 | 第92页 |
| 3.3.8 药物性耳聋家系口腔拭子样本检测 | 第92-93页 |
| 3.4 结果 | 第93-103页 |
| 3.4.1 不同突变负荷标准品定量检测结果 | 第93-97页 |
| 3.4.2 散发干血斑样本定量检测及分型结果 | 第97-100页 |
| 3.4.3 药物性耳聋家系口腔拭子样本定量检测及分型结果 | 第100-103页 |
| 3.5 小结 | 第103-104页 |
| 3.6 讨论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-107页 |
| 第4章 基于微液滴数字PCR进行耳聋无创产前诊断的初步研究 | 第107-131页 |
| 4.1 前言 | 第107页 |
| 4.2 材料 | 第107-110页 |
| 4.2.1 孕妇外周血样本 | 第107-108页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第108-109页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第109-110页 |
| 4.2.4 生物信息数据库及辅助分析软件 | 第110页 |
| 4.3 方法 | 第110-118页 |
| 4.3.1 孕妇外周血样本采集、cfDNA提取及浓缩 | 第110-112页 |
| 4.3.2 血浆游离DNA模拟样本的制备 | 第112-113页 |
| 4.3.3 引物和探针设计 | 第113-115页 |
| 4.3.4 微液滴数字PCR (ddPCR)工作流程 | 第115页 |
| 4.3.5 特异性验证 | 第115-116页 |
| 4.3.6 定量准确性验证 | 第116页 |
| 4.3.7 模拟样本检测 | 第116-117页 |
| 4.3.8 孕妇血浆游离DNA临床样本检测 | 第117页 |
| 4.3.9 数据分析及结果判读 | 第117-118页 |
| 4.4 结果 | 第118-127页 |
| 4.4.1 片段化DNA分析 | 第118-119页 |
| 4.4.2 特异性检测结果 | 第119页 |
| 4.4.3 不同浓度样本定量准确性结果 | 第119-122页 |
| 4.4.4 模拟样本定量检测结果 | 第122-124页 |
| 4.4.5 孕妇游离血浆DNA临床样本检测结果 | 第124-127页 |
| 4.5 小结 | 第127-128页 |
| 4.6 讨论 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-131页 |
| 博士期间发表论文 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 个人简历 | 第133页 |
