致谢 | 第5-9页 |
英文缩写词表 | 第9-10页 |
摘要 | 第10-12页 |
文献综述 | 第12-21页 |
1 aMPV的病原学 | 第12-14页 |
1.1 aMPV的病原学特性 | 第12-13页 |
1.2 aMPV的分类 | 第13页 |
1.3 aMPV对禽的致病性 | 第13-14页 |
2 禽偏肺病毒的检测方法研究进展 | 第14-20页 |
2.1 病毒的分离鉴定 | 第14-15页 |
2.2 分子生物学方法 | 第15-17页 |
2.3 血清学方法 | 第17-20页 |
3 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
试验研究 | 第21-44页 |
试验一:禽偏肺病毒通用型EvaGreen荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第21-29页 |
1 材料和方法 | 第21-23页 |
1.1 毒株和临床样品 | 第21页 |
1.2 主要试剂和仪器 | 第21-22页 |
1.3 引物设计 | 第22页 |
1.4 病毒RNA的提取与cDNA合成 | 第22页 |
1.5 标准质粒的构建 | 第22-23页 |
1.6 aMPVEvaGreen荧光定量RT-PCR方法的建立 | 第23页 |
1.7 aMPVEvaGreen实时荧光定量RT-PCR方法特异性试验 | 第23页 |
1.8 aMPVEvaGreen实时荧光定量RT-PCR方法敏感性试验 | 第23页 |
1.9 aMPVEvaGreen实时荧光定量RT-PCR方法重复性试验 | 第23页 |
1.10 临床样品检测 | 第23页 |
2 结果 | 第23-27页 |
2.1 aMPVEvaGreen实时荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第23-25页 |
2.2 aMPVEvaGreen实时荧光定量RT-PCR的特异性 | 第25页 |
2.3 aMPVEvaGreen实时荧光定量RT-PCR的敏感性 | 第25-26页 |
2.4 aMPVEvaGreen实时荧光定量RT-PCR的重复性 | 第26-27页 |
2.5 临床样品检测 | 第27页 |
3 小结 | 第27-29页 |
试验二:aMPVN蛋白的原核表达和免疫反应性分析 | 第29-37页 |
1 材料与方法 | 第29-31页 |
1.1 材料与试剂 | 第29页 |
1.2 主要仪器 | 第29页 |
1.3 重组质粒pET32a-N的构建 | 第29-30页 |
1.4 重组蛋白的表达 | 第30页 |
1.5 N蛋白的回收纯化 | 第30页 |
1.6 多克隆抗体的制备 | 第30-31页 |
1.7 N蛋白的Westernblotting鉴定 | 第31页 |
2 结果 | 第31-35页 |
2.1 重组表达载体的鉴定 | 第31-32页 |
2.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第32-34页 |
2.3 N蛋白的Westernblotting分析 | 第34-35页 |
3 小结 | 第35-37页 |
试验三:基于N蛋白的禽偏肺病毒通用型间接ELISA抗体检测方法的建立 | 第37-44页 |
1 材料与方法 | 第37-39页 |
1.1 材料 | 第37页 |
1.2 包被抗原的制备 | 第37页 |
1.3 aMPVN蛋白间接ELISA诊断方法的建立 | 第37-38页 |
1.4 间接ELISA方法判定标准的确定 | 第38页 |
1.5 特异性试验 | 第38页 |
1.6 敏感性试验 | 第38页 |
1.7 重复性试验 | 第38-39页 |
1.8 准确性试验 | 第39页 |
1.9 临床血清样品检测 | 第39页 |
2 结果 | 第39-43页 |
2.1 包被抗原的制备 | 第39页 |
2.2 间接ELISA最佳反应条件的确定 | 第39-40页 |
2.3 间接ELISA方法判定标准的确定 | 第40页 |
2.4 特异性试验 | 第40页 |
2.5 敏感性试验 | 第40-41页 |
2.6 重复性试验 | 第41-42页 |
2.7 准确性试验 | 第42页 |
2.8 临床血清样品检测 | 第42-43页 |
3 小结 | 第43-44页 |
全文总结 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-52页 |
ABSTRACT | 第52-54页 |
附:作者读研期间发表文章 | 第55页 |