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基于ICP-MS的生物分析新方法在癌细胞分析中的应用

摘要第7-10页
Abstract第10-13页
名词术语及缩写第14-21页
第一章 前言第21-55页
    1.1 概述第21-23页
    1.2 CTCs的检测方法第23-26页
        1.2.1 分子水平上CTCs检测第24页
        1.2.2 细胞水平上CTCs检测第24-26页
    1.3 ICP-MS在生物分析中的新应用第26-45页
        1.3.1 ICP-MS概述第26-28页
        1.3.2 ICP-MS在蛋白质分析中的应用第28-35页
            1.3.2.1 内源性标记方法第29页
            1.3.2.2 外源性标记方法第29-35页
                1.3.2.2.1 金属螯合物标记第30-32页
                1.3.2.2.2 金属纳米粒子标记第32-34页
                1.3.2.2.3 聚合物标记第34-35页
        1.3.3 ICP-MS在细胞分析中的应用第35-45页
            1.3.3.1 元素标记ICP-MS检测的细胞分析法第35-43页
                1.3.3.1.1 金属螯合物标记第36-37页
                1.3.3.1.2 聚合物标记第37-39页
                1.3.3.1.3 无机纳米粒子标记第39-43页
            1.3.3.2 ICP-MS在单细胞分析中的应用第43-45页
    1.4 CTCs样品前处理技术第45-53页
        1.4.1. 非特异性分选CTCs第46-47页
            1.4.1.1 细胞尺寸第46-47页
            1.4.1.2 细胞密度第47页
            1.4.1.3 细胞电参数第47页
        1.4.2 特异性分选CTCs第47-51页
            1.4.2.1 磁性纳米材料在生物分离中的应用第48页
            1.4.2.2 免疫磁珠正/负分选CTCs第48-51页
        1.4.3 微流控芯片第51-53页
    1.5 立题思想第53-55页
第二章 基于PbS NPs标记与ICP-MS检测联用分析HepG2贴壁细胞第55-71页
    §2.1 引言第55-56页
    §2.2 实验部分第56-60页
        2.2.1 仪器及主要工作条件第56-57页
        2.2.2 试剂及标准溶液第57-58页
        2.2.3 细胞培养第58页
        2.2.4 纳米粒子PbS NPs-COOH的合成第58页
        2.2.5 PbS NPs-COOH与蛋白质分子的偶联第58-59页
        2.2.6 PbS NPs-COOH探针制备第59页
        2.2.7 免疫荧光染色实验第59-60页
        2.2.8 基于PbS NPs标记与ICP-MS检测联用分析HepG2细胞实验的可行性探讨第60页
    §2.3 结果与讨论第60-70页
        2.3.1 PbS NPs材料透射电镜表征TEM第60-61页
        2.3.2 PbS NPs和PbS-anti-EpCAM动态光散射DLS表征第61-63页
        2.3.3 PbS NPs标记效率第63页
        2.3.4 HepG2细胞特异性表达EpCAM抗原第63-65页
        2.3.5 基于PbS NPs标记与ICP-MS检测联用分析HepG2细胞实验的可行性探讨第65页
        2.3.6 实验条件优化第65-69页
            2.3.6.1 探针PbS NPs-anti-EpCAM与细胞的作用时间第65-66页
            2.3.6.2 探针PbS NPs-anti-EpCAM的体积第66-67页
            2.3.6.3 洗脱条件第67-69页
        2.3.7 分析性能考察第69-70页
    §2.4 小结第70-71页
第三章 基于纳米金标记磁固相免疫与ICP-MS联用用于悬浮Jurkat T细胞的分析第71-92页
    §3.1 引言第71-72页
    §3.2 实验部分第72-78页
        3.2.1 仪器及主要工作条件第72-73页
        3.2.2 试剂及标准溶液第73-74页
        3.2.3 细胞培养第74页
        3.2.4 纳米金Au NPs的合成第74页
        3.2.5 纳米金标记探针Au NPs-anti-CD2的合成第74-75页
        3.2.6 纳米金标记效率的考察第75页
        3.2.7 免疫荧光染色实验第75页
        3.2.8 MBs-antiCD3磁珠对Jurkat T细胞捕获率的考察第75-76页
        3.2.9 基于纳米金标记磁固相免疫与ICP-MS联用用于悬浮Jurkat T细胞方法的可行性探讨第76-77页
        3.2.10 方法特异性考察第77页
        3.2.11 交叉反应性考察第77-78页
        3.2.12 实际样品分析第78页
    §3.3 结果与讨论第78-90页
        3.3.1 探针Au NPs-antiCD2的TEM表征第78-79页
        3.3.2 Au NPs偶联抗体前后的UV-Vis表征第79页
        3.3.3 Au NPs标记效率的考察第79-80页
        3.3.4 Jurkat T细胞表面特异性表达CD2抗原第80页
        3.3.5 条件优化第80-87页
            3.3.5.1. 纳米金与抗体标记比例的优化第81-82页
            3.3.5.2 磁珠捕获细胞的作用温度第82-83页
            3.3.5.3 磁珠捕获细胞的作用时间第83页
            3.3.5.4 磁珠的封闭时间第83-84页
            3.3.5.5 细胞与标记探针的作用时间第84页
            3.3.5.6 洗脱条件第84-87页
            3.3.5.7 探针用量第87页
        3.3.6 方法特异性的考察第87-88页
        3.3.7 方法交叉反应性的考察第88-89页
        3.3.8 方法分析性能评价第89-90页
            3.3.8.1 免疫磁珠的细胞捕获率考察第89-90页
        3.3.9 实际样品分析第90页
    §3.4 小结第90-92页
第四章 新型三功能探针标记细胞成像与ICP-MS检测联用用于癌细胞分析第92-107页
    §4.1 引言第92-94页
    §4.2 实验部分第94-98页
        4.2.1 仪器及主要工作条件第94-95页
        4.2.2 试剂及标准溶液第95-96页
        4.2.3 细胞培养第96页
        4.2.4 PAA改性的UCNPs纳米粒子的合成第96页
        4.2.5 UCNPs-Ab2-Cy3三功能探针的制备第96-97页
        4.2.6 基于新型三功能探针标记细胞成像与ICP-MS检测联用用于癌细胞分析实验可行性探讨第97-98页
    §4.3 结果与讨论第98-106页
        4.3.1 材料UCNPs-PAA偶联抗体前后透射电镜(TEM)表征第98-99页
        4.3.2 UCNPs-PAA的红外光谱表征第99页
        4.3.3 UCNPs-PAA偶联抗体前后发光情况(upconversion luminescence,UCL)第99-100页
        4.3.4 UCNPs-PAA材料及偶联抗体后UCNPs-Ab2-Cy3的动态光散射DLS表征第100-102页
        4.3.5 UCNPs-Ab2-Cy3(染料Cy3)的荧光光谱表征第102页
        4.3.6 UCNPs-PAA偶联抗体后UV-Vis表征第102-103页
        4.3.7 UCNPs-PAA对抗体的标记效率第103页
        4.3.8 荧光染料标记细胞成像和近红外激发UCNPs标记细胞成像第103-105页
        4.3.9 基于细胞成像检测方法的特异性考察第105-106页
        4.3.10 ICP-MS检测第106页
    §4.4 小结第106-107页
第五章 ICP-DRC-MS检测单细胞中的镁元素第107-120页
    §5.1 引言第107-108页
    §5.2 实验部分第108-111页
        5.2.1 仪器及主要工作条件第108-109页
        5.2.2 试剂及标准溶液第109页
        5.2.3 细胞培养及制备Jurkat T单细胞悬浮液第109-110页
        5.2.4 Jurkat T细胞消解第110页
        5.2.5 Jurkat T细胞破膜第110页
        5.2.6 Jurkat T单细胞悬浮液引入时间分辨ICP-DRC-MS检测第110-111页
    §5.3 结果与讨论第111-119页
        5.3.1 电感耦合等离子体质谱DRC参数优化第111-113页
            5.3.1.1 碰撞气体流速第111-112页
            5.3.1.2 DS-5雾化器的样品提升流速第112-113页
        5.3.2 ICP-DRC-MS检测单细胞第113-118页
            5.3.2.1 ICP-DRC-MS检测单细胞的实验可行性第113-114页
            5.3.2.2 考察跳峰个数与细胞密度的关系第114-116页
            5.3.2.3 ICP-DRC-MS对单细胞中的Mg跳峰强度进行统计学分析第116-117页
            5.3.2.4 ICP-DRC-MS定量分析单细胞中的Mg元素含量第117-118页
        5.3.3 Jurkat T细胞内~(24)Mg元素平均含量测定第118-119页
    §5.4 小结第119-120页
第六章 微流控芯片作为细胞前处理手段提供单行排列的细胞流第120-129页
    §6.1 引言第120-121页
    §6.2 实验部分第121-123页
        6.2.1 仪器及主要工作条件第121页
        6.2.2 试剂及标准溶液第121-122页
        6.2.3 细胞培养第122页
        6.2.4 微流控芯片的设计与制作第122页
        6.2.5 基于微流控芯片技术获得单行排列的细胞流第122-123页
    §6.3 结果与讨论第123-128页
        6.3.1 芯片鞘流角度第123-124页
        6.3.2 鞘流液体第124页
        6.3.3 通道宽度第124-125页
        6.3.4 样品流与鞘流的流速比第125-128页
    §6.4 总结第128-129页
第七章 总结第129-131页
参考文献第131-156页
附录:作者在攻读博士学位期间已发表或待发表的论文第156-157页
致谢第157页

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