摘要 | 第7-10页 |
Abstract | 第10-13页 |
名词术语及缩写 | 第14-21页 |
第一章 前言 | 第21-55页 |
1.1 概述 | 第21-23页 |
1.2 CTCs的检测方法 | 第23-26页 |
1.2.1 分子水平上CTCs检测 | 第24页 |
1.2.2 细胞水平上CTCs检测 | 第24-26页 |
1.3 ICP-MS在生物分析中的新应用 | 第26-45页 |
1.3.1 ICP-MS概述 | 第26-28页 |
1.3.2 ICP-MS在蛋白质分析中的应用 | 第28-35页 |
1.3.2.1 内源性标记方法 | 第29页 |
1.3.2.2 外源性标记方法 | 第29-35页 |
1.3.2.2.1 金属螯合物标记 | 第30-32页 |
1.3.2.2.2 金属纳米粒子标记 | 第32-34页 |
1.3.2.2.3 聚合物标记 | 第34-35页 |
1.3.3 ICP-MS在细胞分析中的应用 | 第35-45页 |
1.3.3.1 元素标记ICP-MS检测的细胞分析法 | 第35-43页 |
1.3.3.1.1 金属螯合物标记 | 第36-37页 |
1.3.3.1.2 聚合物标记 | 第37-39页 |
1.3.3.1.3 无机纳米粒子标记 | 第39-43页 |
1.3.3.2 ICP-MS在单细胞分析中的应用 | 第43-45页 |
1.4 CTCs样品前处理技术 | 第45-53页 |
1.4.1. 非特异性分选CTCs | 第46-47页 |
1.4.1.1 细胞尺寸 | 第46-47页 |
1.4.1.2 细胞密度 | 第47页 |
1.4.1.3 细胞电参数 | 第47页 |
1.4.2 特异性分选CTCs | 第47-51页 |
1.4.2.1 磁性纳米材料在生物分离中的应用 | 第48页 |
1.4.2.2 免疫磁珠正/负分选CTCs | 第48-51页 |
1.4.3 微流控芯片 | 第51-53页 |
1.5 立题思想 | 第53-55页 |
第二章 基于PbS NPs标记与ICP-MS检测联用分析HepG2贴壁细胞 | 第55-71页 |
§2.1 引言 | 第55-56页 |
§2.2 实验部分 | 第56-60页 |
2.2.1 仪器及主要工作条件 | 第56-57页 |
2.2.2 试剂及标准溶液 | 第57-58页 |
2.2.3 细胞培养 | 第58页 |
2.2.4 纳米粒子PbS NPs-COOH的合成 | 第58页 |
2.2.5 PbS NPs-COOH与蛋白质分子的偶联 | 第58-59页 |
2.2.6 PbS NPs-COOH探针制备 | 第59页 |
2.2.7 免疫荧光染色实验 | 第59-60页 |
2.2.8 基于PbS NPs标记与ICP-MS检测联用分析HepG2细胞实验的可行性探讨 | 第60页 |
§2.3 结果与讨论 | 第60-70页 |
2.3.1 PbS NPs材料透射电镜表征TEM | 第60-61页 |
2.3.2 PbS NPs和PbS-anti-EpCAM动态光散射DLS表征 | 第61-63页 |
2.3.3 PbS NPs标记效率 | 第63页 |
2.3.4 HepG2细胞特异性表达EpCAM抗原 | 第63-65页 |
2.3.5 基于PbS NPs标记与ICP-MS检测联用分析HepG2细胞实验的可行性探讨 | 第65页 |
2.3.6 实验条件优化 | 第65-69页 |
2.3.6.1 探针PbS NPs-anti-EpCAM与细胞的作用时间 | 第65-66页 |
2.3.6.2 探针PbS NPs-anti-EpCAM的体积 | 第66-67页 |
2.3.6.3 洗脱条件 | 第67-69页 |
2.3.7 分析性能考察 | 第69-70页 |
§2.4 小结 | 第70-71页 |
第三章 基于纳米金标记磁固相免疫与ICP-MS联用用于悬浮Jurkat T细胞的分析 | 第71-92页 |
§3.1 引言 | 第71-72页 |
§3.2 实验部分 | 第72-78页 |
3.2.1 仪器及主要工作条件 | 第72-73页 |
3.2.2 试剂及标准溶液 | 第73-74页 |
3.2.3 细胞培养 | 第74页 |
3.2.4 纳米金Au NPs的合成 | 第74页 |
3.2.5 纳米金标记探针Au NPs-anti-CD2的合成 | 第74-75页 |
3.2.6 纳米金标记效率的考察 | 第75页 |
3.2.7 免疫荧光染色实验 | 第75页 |
3.2.8 MBs-antiCD3磁珠对Jurkat T细胞捕获率的考察 | 第75-76页 |
3.2.9 基于纳米金标记磁固相免疫与ICP-MS联用用于悬浮Jurkat T细胞方法的可行性探讨 | 第76-77页 |
3.2.10 方法特异性考察 | 第77页 |
3.2.11 交叉反应性考察 | 第77-78页 |
3.2.12 实际样品分析 | 第78页 |
§3.3 结果与讨论 | 第78-90页 |
3.3.1 探针Au NPs-antiCD2的TEM表征 | 第78-79页 |
3.3.2 Au NPs偶联抗体前后的UV-Vis表征 | 第79页 |
3.3.3 Au NPs标记效率的考察 | 第79-80页 |
3.3.4 Jurkat T细胞表面特异性表达CD2抗原 | 第80页 |
3.3.5 条件优化 | 第80-87页 |
3.3.5.1. 纳米金与抗体标记比例的优化 | 第81-82页 |
3.3.5.2 磁珠捕获细胞的作用温度 | 第82-83页 |
3.3.5.3 磁珠捕获细胞的作用时间 | 第83页 |
3.3.5.4 磁珠的封闭时间 | 第83-84页 |
3.3.5.5 细胞与标记探针的作用时间 | 第84页 |
3.3.5.6 洗脱条件 | 第84-87页 |
3.3.5.7 探针用量 | 第87页 |
3.3.6 方法特异性的考察 | 第87-88页 |
3.3.7 方法交叉反应性的考察 | 第88-89页 |
3.3.8 方法分析性能评价 | 第89-90页 |
3.3.8.1 免疫磁珠的细胞捕获率考察 | 第89-90页 |
3.3.9 实际样品分析 | 第90页 |
§3.4 小结 | 第90-92页 |
第四章 新型三功能探针标记细胞成像与ICP-MS检测联用用于癌细胞分析 | 第92-107页 |
§4.1 引言 | 第92-94页 |
§4.2 实验部分 | 第94-98页 |
4.2.1 仪器及主要工作条件 | 第94-95页 |
4.2.2 试剂及标准溶液 | 第95-96页 |
4.2.3 细胞培养 | 第96页 |
4.2.4 PAA改性的UCNPs纳米粒子的合成 | 第96页 |
4.2.5 UCNPs-Ab2-Cy3三功能探针的制备 | 第96-97页 |
4.2.6 基于新型三功能探针标记细胞成像与ICP-MS检测联用用于癌细胞分析实验可行性探讨 | 第97-98页 |
§4.3 结果与讨论 | 第98-106页 |
4.3.1 材料UCNPs-PAA偶联抗体前后透射电镜(TEM)表征 | 第98-99页 |
4.3.2 UCNPs-PAA的红外光谱表征 | 第99页 |
4.3.3 UCNPs-PAA偶联抗体前后发光情况(upconversion luminescence,UCL) | 第99-100页 |
4.3.4 UCNPs-PAA材料及偶联抗体后UCNPs-Ab2-Cy3的动态光散射DLS表征 | 第100-102页 |
4.3.5 UCNPs-Ab2-Cy3(染料Cy3)的荧光光谱表征 | 第102页 |
4.3.6 UCNPs-PAA偶联抗体后UV-Vis表征 | 第102-103页 |
4.3.7 UCNPs-PAA对抗体的标记效率 | 第103页 |
4.3.8 荧光染料标记细胞成像和近红外激发UCNPs标记细胞成像 | 第103-105页 |
4.3.9 基于细胞成像检测方法的特异性考察 | 第105-106页 |
4.3.10 ICP-MS检测 | 第106页 |
§4.4 小结 | 第106-107页 |
第五章 ICP-DRC-MS检测单细胞中的镁元素 | 第107-120页 |
§5.1 引言 | 第107-108页 |
§5.2 实验部分 | 第108-111页 |
5.2.1 仪器及主要工作条件 | 第108-109页 |
5.2.2 试剂及标准溶液 | 第109页 |
5.2.3 细胞培养及制备Jurkat T单细胞悬浮液 | 第109-110页 |
5.2.4 Jurkat T细胞消解 | 第110页 |
5.2.5 Jurkat T细胞破膜 | 第110页 |
5.2.6 Jurkat T单细胞悬浮液引入时间分辨ICP-DRC-MS检测 | 第110-111页 |
§5.3 结果与讨论 | 第111-119页 |
5.3.1 电感耦合等离子体质谱DRC参数优化 | 第111-113页 |
5.3.1.1 碰撞气体流速 | 第111-112页 |
5.3.1.2 DS-5雾化器的样品提升流速 | 第112-113页 |
5.3.2 ICP-DRC-MS检测单细胞 | 第113-118页 |
5.3.2.1 ICP-DRC-MS检测单细胞的实验可行性 | 第113-114页 |
5.3.2.2 考察跳峰个数与细胞密度的关系 | 第114-116页 |
5.3.2.3 ICP-DRC-MS对单细胞中的Mg跳峰强度进行统计学分析 | 第116-117页 |
5.3.2.4 ICP-DRC-MS定量分析单细胞中的Mg元素含量 | 第117-118页 |
5.3.3 Jurkat T细胞内~(24)Mg元素平均含量测定 | 第118-119页 |
§5.4 小结 | 第119-120页 |
第六章 微流控芯片作为细胞前处理手段提供单行排列的细胞流 | 第120-129页 |
§6.1 引言 | 第120-121页 |
§6.2 实验部分 | 第121-123页 |
6.2.1 仪器及主要工作条件 | 第121页 |
6.2.2 试剂及标准溶液 | 第121-122页 |
6.2.3 细胞培养 | 第122页 |
6.2.4 微流控芯片的设计与制作 | 第122页 |
6.2.5 基于微流控芯片技术获得单行排列的细胞流 | 第122-123页 |
§6.3 结果与讨论 | 第123-128页 |
6.3.1 芯片鞘流角度 | 第123-124页 |
6.3.2 鞘流液体 | 第124页 |
6.3.3 通道宽度 | 第124-125页 |
6.3.4 样品流与鞘流的流速比 | 第125-128页 |
§6.4 总结 | 第128-129页 |
第七章 总结 | 第129-131页 |
参考文献 | 第131-156页 |
附录:作者在攻读博士学位期间已发表或待发表的论文 | 第156-157页 |
致谢 | 第157页 |