| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 材料与方法 | 第13-52页 |
| 一、材料 | 第13-25页 |
| 1. 实验动物 | 第13页 |
| 2. 菌株 | 第13页 |
| 3. 质粒载体 | 第13-18页 |
| 4. 细菌用培养基 | 第18-19页 |
| 5. 细胞系及培养基 | 第19页 |
| 6. 主要仪器、设备及软件 | 第19页 |
| 7. 工具酶、实验所需试剂、器材 | 第19-20页 |
| 8. 抗体 | 第20-21页 |
| 9. 二抗 | 第21页 |
| 10. 引物的设计与合成 | 第21页 |
| 11. 原核表达载体的构建 | 第21页 |
| 12. 真核表达载体的构建 | 第21页 |
| 13.用于构建CRISPR-Cas9 Rnfl38-gRNA的质粒载体的构建 | 第21-22页 |
| 14. Real-Time PCR引物设计 | 第22-24页 |
| 15. siRNA的设计与合成: | 第24页 |
| 16. Rnf138扩增鉴定引物 | 第24-25页 |
| 二、实验方法 | 第25-52页 |
| 1. 细胞或组织总RNA提取方法和逆转录 | 第25-26页 |
| 2. 基因的克隆 | 第26-27页 |
| 3. 质粒的转化与质粒的提取 | 第27-28页 |
| 4. 重组蛋白的原核表达 | 第28-29页 |
| 5. 原核表达蛋白质的纯化 | 第29-31页 |
| 6. 细胞培养相关实验 | 第31-32页 |
| 7. 蛋白质分析相关实验 | 第32-35页 |
| 8. HE染色实验 | 第35-36页 |
| 9. 免疫组化实验 | 第36-37页 |
| 10. 酵母双杂交实验 | 第37-45页 |
| 11. 染色质铺展实验 | 第45-46页 |
| 12. 小鼠生育实验 | 第46页 |
| 13. 小鼠精子计数 | 第46页 |
| 14. TUNEL检测细胞凋亡 | 第46-47页 |
| 15. CRISP-Cas9技术敲除基因 | 第47-48页 |
| 16. Rnf138抗体的制备 | 第48-49页 |
| 17. 细胞增殖实验 | 第49页 |
| 18. 蛋白质芯片检测相互作用蛋白 | 第49-52页 |
| 实验结果 | 第52-79页 |
| 1. RNF138基因序列的分析 | 第52-53页 |
| 2. Rnf138抗体的制备与筛选 | 第53-55页 |
| 3. Rnf138在小鼠不同组织的表达检测 | 第55-56页 |
| 4. Rnf138在睾丸组织中的时间表达谱 | 第56-57页 |
| 5. 构建Rnf138的敲除小鼠 | 第57-60页 |
| 6. Rnf138在睾丸组织中的定位 | 第60页 |
| 7. Rnf138敲除后小鼠睾丸发育受损 | 第60-61页 |
| 8. Rnf138对小鼠精子发生的影响 | 第61-63页 |
| 9. Rnf138敲除鼠附睾表型 | 第63-64页 |
| 10. Rnf138对小鼠生精细胞凋亡的影响 | 第64页 |
| 11. Rnf138对精原细胞分化的调节作用 | 第64-66页 |
| 12. Rnf138对精原细胞增殖的影响 | 第66页 |
| 13. Rnf138对减数分裂过程的影响 | 第66-68页 |
| 14. Rnf138在成年小鼠精子发生中的作用 | 第68-69页 |
| 15. RNA Sequencing | 第69-70页 |
| 16. GC1、GC2稳定敲除Rnf138细胞系构建和细胞增殖实验 | 第70-72页 |
| 17. HuProt~(TM)蛋白质芯片检测RNF138相互作用蛋白质 | 第72-75页 |
| 18. 酵母双杂交实验 | 第75-79页 |
| 讨论 | 第79-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 结论 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90-92页 |
| 综述 E3 泛素连接酶及其与精子发生的研究进展 | 第92-104页 |
| 1. E3泛素连接酶的分类及反应特点 | 第92-94页 |
| 2. 泛素化修饰的差异 | 第94-95页 |
| 3. E3泛素连接酶与精子发生的关系 | 第95-100页 |
| 3.1 E3泛素连接酶在睾丸中的表达 | 第95页 |
| 3.2 精子发生中的生精细胞 | 第95-97页 |
| 3.3 E3泛素连接酶与精子形态发生的相关性 | 第97页 |
| 3.4 E3泛素连接酶与睾丸细胞连接 | 第97-98页 |
| 3.5 E3泛素连接酶与生精细胞的凋亡 | 第98-99页 |
| 3.6 E3泛素连接酶与减数分裂 | 第99-100页 |
| 结语 | 第100页 |
| 参考文献 | 第100-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 博士在读期间论文与会议摘要写作情况 | 第105-106页 |
