| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 引言 | 第16-26页 |
| 1.文献综述 | 第16-24页 |
| 1.1 .斑节对虾简介 | 第16页 |
| 1.2 .甲壳动物高血糖激素家族的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 .蛋白质一级结构特征及分类标准(CPRP) | 第16-17页 |
| 1.2.2 .甲壳动物高血糖激素家族成员及其功能 | 第17-19页 |
| 1.2.3 .多功能(multifunctional)现象与多态性现象(polymorphism) | 第19-21页 |
| 1.2.4 .组织特异性及可变剪接(alternatively spliced) | 第21页 |
| 1.3 .甲壳动物高血糖激素家族的主要研究方法 | 第21-24页 |
| 1.3.1 .高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)和反相高效液相色谱法(RP-HPLC) | 第21-22页 |
| 1.3.2 .活体注射法 | 第22页 |
| 1.3.3 .原核表达技术 | 第22页 |
| 1.3.4 .免疫组化法 | 第22-23页 |
| 1.3.5 .荧光定量技术(realtime fluorescence quantitative,RTFQ) | 第23页 |
| 1.3.6 .RNAi技术 | 第23-24页 |
| 1.3.7 .膜片钳技术 | 第24页 |
| 2.本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 斑节对虾CHH-Ⅰ型基因PmHHLP组织特异性研究 | 第26-55页 |
| 1.实验材料 | 第26-29页 |
| 1.1 .实验动物 | 第26页 |
| 1.2 .实验仪器 | 第26-27页 |
| 1.3 .实验试剂及配制方法 | 第27-29页 |
| 2.实验方法 | 第29-39页 |
| 2.1 .总RNA提取 | 第29页 |
| 2.2 .cDNA文库构建 | 第29页 |
| 2.3 .基因组DNA提取 | 第29页 |
| 2.4 .引物设计 | 第29-30页 |
| 2.5 .基因克隆及产物纯化 | 第30-31页 |
| 2.6 .5’和3’RACEcDNA模板的合成和RACE反应 | 第31-34页 |
| 2.7 .基因组序列验证 | 第34页 |
| 2.8 .重组质粒构建和细胞转化 | 第34页 |
| 2.9 .重组细胞克隆、菌液PCR检验及目的片段测序 | 第34-35页 |
| 2.10 .序列拼接与生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.11 .精荚再生实验及其日常管理 | 第35-36页 |
| 2.12 .实时荧光定量PCR模板的制备 | 第36页 |
| 2.13 .组织差异表达 | 第36-37页 |
| 2.14 .精荚再生过程中的转录水平表达分析 | 第37页 |
| 2.15 .荧光原位杂交实验 | 第37-38页 |
| 2.16 .双链RNA的体外合成及dsPmHHLP在精荚再生过程中的注射实验 | 第38-39页 |
| 3.实验结果 | 第39-51页 |
| 3.1 .PmHHLP全序列信息及生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 3.2 .多重序列比对和系统进化树分析 | 第41-45页 |
| 3.3 .组织差异表达分析 | 第45-46页 |
| 3.4 .精荚再生实验样品采集结果 | 第46-48页 |
| 3.5 .精荚再生过程中的转录水平表达分析 | 第48-49页 |
| 3.6 .利用荧光原位杂交技术对精荚再生过程中的PmHHLP进行定位 | 第49-50页 |
| 3.7 .dsPmHHLP注射后对精荚再生过程的影响 | 第50-51页 |
| 4.讨论 | 第51-55页 |
| 第三章 斑节对虾CHH-Ⅰ型基因PmHHLPP的血糖调控研究 | 第55-76页 |
| 1.实验材料 | 第55-57页 |
| 1.1 .实验动物 | 第55页 |
| 1.2 .实验仪器 | 第55页 |
| 1.3 .实验试剂及配制方法 | 第55-57页 |
| 2.实验方法 | 第57-61页 |
| 2.1 .引物设计 | 第57-58页 |
| 2.2 .基因和基因组序列验证 | 第58-59页 |
| 2.3 .5’和3’RACEcDNA模板的合成和RACE反应 | 第59页 |
| 2.4 .序列拼接与生物信息学分析 | 第59页 |
| 2.5 .幼体变态期的取样 | 第59页 |
| 2.6 .不同发育时期的取样 | 第59页 |
| 2.7 .实时荧光定量PCR模板的制备 | 第59-60页 |
| 2.8 .组织差异表达分析 | 第60页 |
| 2.9 .幼体变态期和不同发育期差异表达分析 | 第60页 |
| 2.10 .多巴胺注射实验 | 第60页 |
| 2.11 .双链RNA的体外合成及dsPmHHLPP的注射实验 | 第60-61页 |
| 3.实验结果 | 第61-72页 |
| 3.1 .PmHHLPP全序列信息及生物信息学分析 | 第61-64页 |
| 3.2 .多重序列比对和系统进化树分析 | 第64-68页 |
| 3.3 .组织差异表达分析 | 第68页 |
| 3.4 .幼体变态期差异表达分析 | 第68-69页 |
| 3.5 .不同发育期差异表达分析 | 第69-71页 |
| 3.6 .血糖调控研究 | 第71-72页 |
| 4.讨论 | 第72-76页 |
| 第四章 斑节对虾CHH-Ⅰ型基因PmCHH的多功能探索 | 第76-90页 |
| 1.实验材料 | 第76页 |
| 1.1 .实验动物 | 第76页 |
| 1.2 .实验仪器 | 第76页 |
| 1.3 .实验试剂及配制方法 | 第76页 |
| 2.实验方法 | 第76-78页 |
| 2.1 .引物设计 | 第76-78页 |
| 2.2 .序列全长验证与生物信息学分析 | 第77页 |
| 2.3 .基因组序列结构比对分析 | 第77页 |
| 2.4 .组织差异表达研究 | 第77页 |
| 2.5 .眼柄剪除实验 | 第77-78页 |
| 2.6 .卵巢发育取样及差异表达研究 | 第78页 |
| 2.8 .多巴胺注射实验 | 第78页 |
| 2.9 .双链RNA的体外合成及dsPmCHH的注射实验 | 第78页 |
| 3.实验结果 | 第78-87页 |
| 3.1 .PmCHH全序列信息(包括基因组和非编码区)及生物信息学分析 | 第78-80页 |
| 3.2 .多重序列比对和系统进化树分析 | 第80-83页 |
| 3.3 .基因组差异分析 | 第83页 |
| 3.4 .组织差异表达分析 | 第83-84页 |
| 3.5 .幼体变态期差异表达分析 | 第84-85页 |
| 3.6 .眼柄剪除结果分析 | 第85页 |
| 3.7 .卵巢发育各期差异表达分析 | 第85-86页 |
| 3.8 .血糖调控研究 | 第86-87页 |
| 4.讨论 | 第87-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 附录 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
