| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 研究背景 | 第8-12页 |
| 1.1.1 胃肠道间质瘤概况 | 第8页 |
| 1.1.2 GIST中的基因突变 | 第8-10页 |
| 1.1.3 GIST的临床治疗 | 第10-12页 |
| 1.1.4 二代测序在GIST中的应用 | 第12页 |
| 1.2 研究意义 | 第12-13页 |
| 1.3 研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 GIST细胞系及其Imatinib耐药株的构建与鉴定 | 第14-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 临床组织样本 | 第14页 |
| 2.1.2 引物与质粒 | 第14页 |
| 2.1.3 试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.4 仪器 | 第15-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-25页 |
| 2.2.1 质粒构建 | 第16-19页 |
| 2.2.2 病毒包装 | 第19页 |
| 2.2.3 原代细胞分离及其永生化培养 | 第19-20页 |
| 2.2.4 RNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2.5 逆转录 | 第21页 |
| 2.2.6 qPCR | 第21-22页 |
| 2.2.7 免疫组织化学检测 | 第22页 |
| 2.2.8 细胞蛋白提取 | 第22-23页 |
| 2.2.9 Western blot | 第23-24页 |
| 2.2.10 Imatinib耐药细胞株的构建与培养 | 第24页 |
| 2.2.11 细胞周期检测 | 第24页 |
| 2.2.12 CCK-8测细胞增殖 | 第24页 |
| 2.2.13 CCK-8测IC_(50) | 第24-25页 |
| 2.2.14 统计分析 | 第25页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第25-29页 |
| 2.3.1 GIST细胞系的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.2 免疫组织化学检测KIT蛋白表达 | 第26-27页 |
| 2.3.3 Western blot检测KIT蛋白表达 | 第27页 |
| 2.3.4 Imatinib耐药细胞株GIST-FR的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.5 Imatinib敏感性及细胞增殖检测 | 第28-29页 |
| 2.3.6 GIST-FR细胞周期检测 | 第29页 |
| 2.4 本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 GIST临床样本及Imatinib耐药株全外显子组测序 | 第31-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 GIST临床样本 | 第31页 |
| 3.1.2 细胞株 | 第31页 |
| 3.1.3 引物 | 第31页 |
| 3.1.4 试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.5 仪器 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 组织及细胞DNA提取 | 第32-33页 |
| 3.2.2 外显子组测序 | 第33-34页 |
| 3.2.3 PCR | 第34页 |
| 3.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 3.2.5 统计分析 | 第35页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第35-48页 |
| 3.3.1 50例GIST病例临床病理特征 | 第35-37页 |
| 3.3.2 GIST临床样本及Imatinib耐药细胞的全外显子组测序 | 第37-39页 |
| 3.3.3 GIST相关基因突变分析及其验证 | 第39-43页 |
| 3.3.4 Imatinib耐药相关基因突变的分析 | 第43-47页 |
| 3.3.5 GIST中Imatinib耐药相关基因突变的GO分析 | 第47-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-50页 |
| 第四章 结论与展望 | 第50-51页 |
| 4.1 结论 | 第50页 |
| 4.2 展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录一：基因参考序列转录组 | 第58-62页 |
| 附录二：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第62页 |
