| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 抗菌肽 | 第12-14页 |
| 1.1.1 抗菌肽及其抗菌机制 | 第12页 |
| 1.1.2 抗菌肽的功能 | 第12-13页 |
| 1.1.3 抗菌肽在毕赤酵母中的表达 | 第13页 |
| 1.1.4 抗菌肽的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 鱼类和两栖类抗菌肽 | 第14-18页 |
| 1.2.1 鲈鱼抗菌肽 | 第14-15页 |
| 1.2.2 石斑鱼抗菌肽 | 第15页 |
| 1.2.3 豹鳎鱼抗菌肽 | 第15-16页 |
| 1.2.4 泥鳅抗菌肽 | 第16页 |
| 1.2.5 臭蛙抗菌肽 | 第16-18页 |
| 1.3 鱼类和两栖类抗菌肽的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.1 鲈鱼抗菌肽Moronecidin的研究进展 | 第18页 |
| 1.3.2 石斑鱼抗菌肽Epinecidin-1的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.3 豹鳎鱼抗菌肽Pardaxin-4的研究进展 | 第19页 |
| 1.3.4 泥鳅抗菌肽Misgurin的研究进展 | 第19页 |
| 1.4 本课题研究的内容、目的和意义 | 第19-21页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.2 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 研究方法 | 第21-34页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第21-23页 |
| 2.1.1 试剂与培养基 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 抗菌肽的合成 | 第23-25页 |
| 2.2.1 鲈鱼抗菌肽Moronecidin的基因序列设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.2 石斑鱼抗菌肽Epinecidin-1的基因序列设计与合成 | 第23-24页 |
| 2.2.3 豹鳎鱼抗菌肽Pardaxin-4的基因序列设计与合成 | 第24页 |
| 2.2.4 泥鳅抗菌肽Misgurin的基因序列设计与合成 | 第24页 |
| 2.2.5 臭蛙抗菌肽的基因序列设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.3 重组菌株的构建与转化 | 第25-34页 |
| 2.3.1 质粒提取试剂盒提取质粒 | 第25页 |
| 2.3.2 SalI酶线性化重组质粒 | 第25页 |
| 2.3.3 胶回收试剂盒回收 | 第25-26页 |
| 2.3.4 感受态的制备、电击转化及活性检测 | 第26-27页 |
| 2.3.5 五种抗菌肽摇瓶发酵筛选高效菌株 | 第27页 |
| 2.3.6 生物效价的计算方法 | 第27页 |
| 2.3.7 重组表达菌株目的基因的鉴定 | 第27页 |
| 2.3.8 设计并合成特异性引物 | 第27-28页 |
| 2.3.9 PCR扩增反应体系及条件 | 第28页 |
| 2.3.10 抗菌肽Tricine-SDS-PAGE小分子蛋白胶鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.11 抗菌肽的高密度发酵 | 第29-30页 |
| 2.3.12 抗菌肽的抗菌谱的确定 | 第30-31页 |
| 2.3.13 抗菌肽的纯化方法 | 第31-32页 |
| 2.3.14 抗菌肽的溶血活性检测 | 第32页 |
| 2.3.15 抗菌肽的耐高温性检测 | 第32页 |
| 2.3.16 抗菌肽的耐酸碱性检测 | 第32-33页 |
| 2.3.17 抗菌肽的耐消化酶性检测 | 第33页 |
| 2.3.18 抗菌肽的质谱检测 | 第33-34页 |
| 3 实验结果与分析 | 第34-59页 |
| 3.1 鲈鱼抗菌肽的重组表达与抑菌活性检测 | 第34-36页 |
| 3.1.1 重组质粒结构图谱及PCR扩增目的基因 | 第34页 |
| 3.1.2 摇瓶发酵筛选高效菌株 | 第34-35页 |
| 3.1.3 诱导不同时间OD_(600)值的变化及生物效价的测定 | 第35-36页 |
| 3.2 石斑鱼抗菌肽的重组表达与抑菌活性分析 | 第36-39页 |
| 3.2.1 重组质粒结构图谱及PCR扩增目的基因 | 第36-37页 |
| 3.2.2 摇瓶发酵筛选高效菌株 | 第37-38页 |
| 3.2.3 诱导不同时间OD_(600)值的变化及生物效价的测定 | 第38-39页 |
| 3.3 豹鳎鱼抗菌肽的重组表达与抑菌活性分析 | 第39-48页 |
| 3.3.1 重组质粒结构图谱及PCR扩增目的基因 | 第39-40页 |
| 3.3.2 摇瓶发酵筛选高效菌株 | 第40-41页 |
| 3.3.3 诱导不同时间OD_(600)值的变化及生物效价的测定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 发酵液的抑菌活性 | 第42-43页 |
| 3.3.5 抗菌谱 | 第43页 |
| 3.3.6 溶血活性检测 | 第43-44页 |
| 3.3.7 抗菌肽的耐高温性 | 第44页 |
| 3.3.8 抗菌肽的耐酸碱性 | 第44-45页 |
| 3.3.9 抗菌肽的耐消化酶性 | 第45-47页 |
| 3.3.10 抗菌肽的质谱分析 | 第47-48页 |
| 3.4 泥鳅抗菌肽的重组表达与抑菌活性分析 | 第48-56页 |
| 3.4.1 重组质粒结构图谱及PCR扩增目的基因 | 第48页 |
| 3.4.2 摇瓶发酵筛选高效菌株 | 第48-50页 |
| 3.4.3 诱导不同时间OD_(600)值的变化及生物效价的测定 | 第50页 |
| 3.4.4 Tricine-SDS-PAGE小分子量蛋白胶鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4.5 发酵液的抑菌活性 | 第51-52页 |
| 3.4.6 抗菌肽的抗菌谱 | 第52-53页 |
| 3.4.7 抗菌肽的溶血活性检测 | 第53页 |
| 3.4.8 抗菌肽的耐高温性 | 第53-54页 |
| 3.4.9 抗菌肽的耐酸碱性 | 第54-55页 |
| 3.4.10 抗菌肽的耐消化酶性 | 第55页 |
| 3.4.11 抗菌肽的质谱分析 | 第55-56页 |
| 3.5 臭蛙抗菌肽的重组表达与抑菌活性分析 | 第56-59页 |
| 3.5.1 重组质粒结构图谱 | 第56页 |
| 3.5.2 摇瓶发酵筛选高效菌株 | 第56-57页 |
| 3.5.3 诱导不同时间OD_(600)值的变化及生物效价的测定 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第69页 |
