| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第10-14页 |
| 第二章 SW480细胞中差异表达miR-18a-5p及其靶基因筛选与鉴定 | 第14-32页 |
| 2.1 引言 | 第14-15页 |
| 2.2 材料与方法 | 第15-22页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第17页 |
| 2.2.3 主要试剂配制 | 第17-18页 |
| 2.2.4 miR-18a-5p的靶基因预测并筛选 | 第18页 |
| 2.2.5 构建真核miRNA质粒表达载体及质粒DNA抽提 | 第18-21页 |
| 2.2.6 细胞培养 | 第21-22页 |
| 2.3 过表达miR-18a-5p模拟物转染SW480细胞 | 第22-26页 |
| 2.3.1 利用荧光倒置显微镜观察SW480细胞的转染效果 | 第23页 |
| 2.3.2 提取转染SW480细胞总RNA | 第23页 |
| 2.3.3 细胞总RNA的浓度、纯度及完整性检测 | 第23-24页 |
| 2.3.4 qRT-PCR法检测miR-18a-5p表达水平及转染效率 | 第24-25页 |
| 2.3.5 合成microRNA的特异性引物 | 第25-26页 |
| 2.4 统计学分析 | 第26页 |
| 2.5 结果与分析 | 第26-30页 |
| 2.5.1 利用荧光倒置显微镜观察转染SW480细胞的转染效果 | 第26-27页 |
| 2.5.2 细胞总RNA的浓度、纯度及完整性鉴定 | 第27-28页 |
| 2.5.3 qRT-PCR法检测过表达miR-18a-5p相对表达量及转染效率 | 第28-30页 |
| 2.6 讨论与分析 | 第30-32页 |
| 第三章 过表达miR-18a-5p模拟物转染结肠癌SW480细胞增殖与凋亡的研究 | 第32-41页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第34页 |
| 3.2.3 细胞培养 | 第34页 |
| 3.2.4 过表达miR-18a-5p模拟物转染SW480细胞的增殖抑制作用 | 第34-35页 |
| 3.2.5 过表达miR-18a-5p模拟物转染SW480细胞诱导凋亡作用 | 第35页 |
| 3.2.6 统计学方法 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-39页 |
| 3.3.1 过表达miR-18a-5p模拟物转染SW480细胞增殖抑制作用 | 第35-36页 |
| 3.3.2 过表达miR-18a-5p模拟物诱导SW480细胞凋亡作用 | 第36-39页 |
| 3.4 讨论与分析 | 第39-41页 |
| 第四章 过表达miR-18a-5p模拟物转染SW480细胞中靶基因mRNA转录水平的影响 | 第41-54页 |
| 4.1 引言 | 第41-43页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第43-48页 |
| 4.2.1 实验材料和主要试剂 | 第43-44页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第44页 |
| 4.2.3 细胞培养 | 第44页 |
| 4.2.4 过表达miR-18a-5p模拟物转染SW480细胞 | 第44-45页 |
| 4.2.5 转染SW480细胞总RNA的提取 | 第45页 |
| 4.2.6 转染SW480细胞总RNA浓度、纯度、及其完整性检测 | 第45-46页 |
| 4.2.7 实时荧光定量qRT-PCR实验 | 第46-48页 |
| 4.2.8 统计学分析 | 第48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-50页 |
| 4.3.1 转染SW480细胞提取总RNA浓度及纯度检测 | 第48-49页 |
| 4.3.2 荧光定量qRT-PCR检测靶基因mRNA相对表达水平 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论与分析 | 第50-54页 |
| 第五章 过表达miR-802模拟物转染SW480细胞中靶基因mRNA表达量 | 第54-66页 |
| 5.1 引言 | 第54-55页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第55-57页 |
| 5.2.1 实验材料和主要试剂 | 第55-57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57-58页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第57页 |
| 5.3.2 过表达miR-802模拟物转染SW480细胞 | 第57-58页 |
| 5.3.3 转染SW480细胞总RNA的提取 | 第58页 |
| 5.3.4 统计学分析 | 第58页 |
| 5.4 结果与分析 | 第58-64页 |
| 5.4.1 利用荧光倒置显微镜观察转染SW480细胞 | 第58-59页 |
| 5.4.2 总RNA浓度、纯度及完整性检测 | 第59-60页 |
| 5.4.3 qRT-PCR法检测过表达miR-802相对表达量及转染效率 | 第60-62页 |
| 5.4.4 qRT-PCR法检测miR-802靶基因的mRNA相对表达水平 | 第62-64页 |
| 5.5 讨论与分析 | 第64-66页 |
| 5.5.1 过表达miR-802模拟物转染SW480细胞后上调表达的靶基因 | 第64页 |
| 5.5.2 过表达miR-802模拟物转染SW480细胞后下调表达的靶基因 | 第64-66页 |
| 第六章 过表达miR-18a-5p和miR-802对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响 | 第66-72页 |
| 6.1 引言 | 第66-67页 |
| 6.2 材料与方法 | 第67页 |
| 6.2.1 实验主要仪器设备和试剂 | 第67页 |
| 6.3 实验方法 | 第67-68页 |
| 6.3.1 Transwell法检测细胞侵袭实验 | 第67-68页 |
| 6.3.2 Transwell法检测细胞迁移实验 | 第68页 |
| 6.4 统计学分析 | 第68页 |
| 6.5 结果 | 第68-70页 |
| 6.6 讨论与分析 | 第70-72页 |
| 全文总结 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-90页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
